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AZ00003 All-in-One RT SuperMix for qPCR试剂
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生产厂家上海徕仪生物科技有限公司是一家专注于生物技术领域的企业,由数位生物领域资深专家创办。公司现有员工60余人,其中博士以上学历占比24.2%,硕士及以上学历占比53.1%。主营业务包括分子生物学、细胞生物学、化学试剂及实验仪器设备和相关耗材,并提供从基因设计、构建到检测的一站式技术服务。
公司凭借较强的技术力量和科学的管理,为各类服务的顺利开展提供有力支撑,目前已经建立起多个实验平台,包括细胞培养、克隆构建、病毒包装、组织分析、分子检测等,实验流程均严格按照SOP操作。
公司秉承「专业、进取、诚信、务实」的经营理念,严把产品质量关,服务跟踪,以客户的需求为主要目标,竭诚为高校、科研院所的科技工作者提供各类优质产品和服务,帮助客户及单位提高研发效率、提升科研水平和增强市场竞争力。
储运条件
-20℃
产品组成
All-in-One RT SuperMix for qPCR试剂
产品简介
All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA 合成试剂盒,包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反应Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链cDNA 合成所需的所有组分,仅需加入RNA 模板和水即可开始反应。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作为升级后的一链cDNA 合成试剂盒,15 分钟内最长可获得12 kb cDNA,产物可用于qPCR、普通PCR 等实验。从组织或细胞中提取的RNA 往往残留基因组DNA 污染,如果反转录前不做去除处理,下游进行qPCR 反应时基因组DNA 与cDNA会同时进行扩增,尤其是引物设计在同一外显子上时,影响定量准确性。本试剂盒所采用的dsDNase 能够特异性消化双链DNA 或DNARNA杂合双链中的DNA,并且具有热敏感性,在逆转录反应温度下即可快速不可逆地失活。与传统使DNase I 去除基因组DNA 污染的方法相比,dsDNase 无需额外加入EDTA 进行失活,不仅节省实验时间,而且降低了对逆转录反应的抑制。可依据基因组DNA 污染严重程度,选择去基因组DNA 污染与反转录分开进行,或者去基因组DNA 污染与反转录一步进行的操作方法。
使用方法
针对基因组DNA 含量低的RNA 样品(推荐方案)
All-in-One RT SuperMix for qPCR试剂
① 于冰上配制如下反应体系:
a. 推荐使用试剂盒提取的高质量RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀,瞬离;
③ 37℃温育2 min,以去除基因组DNA 污染;
④ 55℃温育15 min;
⑤ 反应结束后,85℃温育2 min 以终止反应;
⑥ 迅速将获得的cDNA 置于冰上,用于后续实验;或立即保存于-20℃。
针对基因组DNA 含量高RNA 样品
1. 基因组DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反应体系:
a. 推荐采用试剂盒提取的RNA 作为模板。
② 轻柔吸打混匀,瞬离;
③ 37℃温育2 min,以去除基因组DNA 污染;
注:若RNA 中基因组DNA 污染严重,可适当延长37℃温育时间至5 min。
④ 65℃温育2 min,使dsDNase 失活,然后置于冰上。
2. 第一链cDNA 合成
① 于冰上配制如下反应体系:
② 轻柔吸打混匀,瞬离;
③ 50℃温育15 min;
注:若目标RNA 不含Poly(A) 结构,可预先25℃温育10 min。
④ 反应结束后,85℃温育2 min,以终止反应;
⑤ 将获得的cDNA 溶液置于冰上,用于后续实验。
注:cDNA 溶液置于-20℃储存,建议不超过1 周;置于-80℃可长期储存。
注意事项
预混液中已经包含Oligo(dT)20VN 和随机引物,不仅适用于包含Poly(A) 结构的真核生物mRNA,也适用于不含Poly(A) 结构的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板,但不适用于miRNA 等小RNA 模板。
美国Azaood公司成立于2004年,是一家开发和生产用于生命科学研究、诊断和生物技术应用的高质量纯化酶、蛋白质、核酸和细胞分离试剂盒、胎牛血清的;Azood公司是通过了ISO9001认证的主要制造商,可以满足从研究到大规模批量生物加工和OEM应用与要求的公司。