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荧光素酶报告基因
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伊莱博生物科技（上海）有限公司，公司总部位于上海长江软件园。2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心，主要以生命科学研究为基础，专注于研究成果转化及技术服务创新，建立了包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学以及动物实验等学科的研究服务体系，为医学领域的发展做出了重要贡献。
目前已建成并投入使用的实验室面积近2800平方米，包含基础实验平台、组学实验平台以及动物实验平台，基本能够满足科研课题研究的全流程。
伊莱博生物拥有专业的技术支持和实验操作人员团队，核心成员来自中科院、复旦、交大、同济等国内重点高校及科研机构，能够提供前沿的、完善的实验技术咨询与服务。
为了响应国家大力发展基础研究的号召，推动实验科学领域的进步，伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势，为广大科研工作者提供实验技术培训服务，从理论和实操两个部分，培养其科研思维以及解决问题的能力，为今后的科研工作奠定坚实的基础。
详细信息
一、应用原理
转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。
其原理简述如下：
（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。
（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。
（3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。
二、技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。
（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。
（5） 培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。
（6） 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
（7）提取蛋白并用于荧光素酶检测。
（8） 加入底物，测定荧光素酶的活性。
（9） 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。
