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增强型ECL化学发光检测试剂盒
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蛋白提取，细胞分析
贝博生物专注于生命科学研究用试剂产品的研究、开发、市场推广和技术服务。致力于为中国广大客户提供量身定制的科研用试剂产品和专业技术服务，帮助科研人员加速生物领域的研究进展。 贝博生物将以高品质的产品和服务打造中国*实力的试剂品牌。
目前已上市了600多种蛋白提取试剂盒（动物、植物、细菌、昆虫、酵母等样本及细胞器提取）及上千种的细胞检测的相关产品-细胞凋亡、增殖毒性、细胞周期、膜电位检测、细胞器荧光探针、活性氧ROS检测、细胞自噬、细胞耗氧OCR、细胞外酸化率ECAR、缺氧检测、粘附检测、钙离子检测、膜通透性转换孔检测、膜流动性检测、外泌体、囊泡提取等。
详细信息
保存温度
2-8℃
注意事项
1.长期不用-20℃储存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
仪器准备
1.移液器
2.冰箱
3.冰盒
2.冰箱
3.冰盒
试剂准备
纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.ECL工作液配制过程中吸取试剂A和试剂B时务必跟换吸头，工作液新鲜配制后立即使用，放置过久会影响灵敏度。
2.根据蛋白丰度不同曝光时间可能是数秒至数小时。
3.曝光时间过长会使背景加深，曝光不足会导致条带模糊。
4.如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
5.必须使用高质量保鲜膜。
2.根据蛋白丰度不同曝光时间可能是数秒至数小时。
3.曝光时间过长会使背景加深，曝光不足会导致条带模糊。
4.如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
5.必须使用高质量保鲜膜。
使用方法
1. 使用合适的方法进行 Western，直至用PBST洗涤二抗。
2. 配制新鲜ECL工作液：试剂A和试剂B按1:1混合均匀后即为ECL工作液。
3. 印迹膜蛋白面朝上，用ECL工作液均匀滴加至印迹膜使其覆盖。ECL工作液使用量大约为0.125ml/cm2膜或根据个人实验习惯使用。
4. 用平头镊夹住印迹膜，垂直置于吸水纸以吸去自然流下的多余工作液，注意不能让膜干掉。
5. 快速将印迹膜置于二层保鲜膜之间，尽量赶尽气泡。
6. 将印迹膜蛋白面朝上，放于X光胶片暗盒内。（如果用显像仪器直接置于仪器中拍照即可）
7. 在暗室内放入X光片，曝光，显影。如果在暗室中可肉眼看到比较亮的条带，建议曝光1分钟-3分钟；如果肉眼看到的带比较淡，建议曝光3-10分钟；如果很淡或基本看不到带，建议曝光10分钟-30分钟。
常见问题分析
1.为什么会发生光淬灭？
抗原浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗原上样量。
操作时间过长，膜逐渐干掉。避免膜干掉。
不良的实验习惯导致设备或试剂污染。例如铁锈和不慎沾染的显影液、定影液，会造成光淬灭，甚至直接导致无荧光。
抗原浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗原上样量。
操作时间过长，膜逐渐干掉。避免膜干掉。
不良的实验习惯导致设备或试剂污染。例如铁锈和不慎沾染的显影液、定影液，会造成光淬灭，甚至直接导致无荧光。
参考文献
1.Ouyang Chen, Zhouheng Ye et al.
Methane attenuates myocardial ischemia injury in rats through anti-oxidative, anti-apoptotic and anti-inflammatory actions
Free Radical Biology and Medicine 2016 （IF=5.784）
2.Guoming Zhang, Song Gao et al.
Pharmacological Postconditioning with Lactic Acid and Hydrogen Rich Saline Alleviates Myocardial Reperfusion Injury in Rats
Scientific reports 2015 （IF=5.228）
3.Hao Liua, Anmin Chena et al.
A short-hairpin RNA targeting osteopontin downregulates MMP-2 and MMP-9 expressions in prostate cancer PC-3 cells
Cancer Letters 2010 Volume 295, Issue 1, Pages 27-37 （IF=6.508）
Methane attenuates myocardial ischemia injury in rats through anti-oxidative, anti-apoptotic and anti-inflammatory actions
Free Radical Biology and Medicine 2016 （IF=5.784）
2.Guoming Zhang, Song Gao et al.
Pharmacological Postconditioning with Lactic Acid and Hydrogen Rich Saline Alleviates Myocardial Reperfusion Injury in Rats
Scientific reports 2015 （IF=5.228）
3.Hao Liua, Anmin Chena et al.
A short-hairpin RNA targeting osteopontin downregulates MMP-2 and MMP-9 expressions in prostate cancer PC-3 cells
Cancer Letters 2010 Volume 295, Issue 1, Pages 27-37 （IF=6.508）
