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鸡分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：鸡分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆、或其它组织液中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡分泌型免疫球蛋白A（sIgA）水平。用纯化的抗-鸡sIgA抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入sIgA，再与HRP标记的羊抗鸡抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡分泌型免疫球蛋白A（sIgA）浓度。

试剂盒组成

标本要求

1．标本处理：（1）血清或血浆：可直接用于检测

            （2）组织：选取新鲜的组织，取2g组织用剪刀剪成小碎块（2～5mm大小）。然后将组织碎块加入10mL离心管，加入2mL样品生理盐水,，室温下孵育5小时（期间不时旋涡混合）后匀浆，2500转/分离心10分钟，取1ml上清液备用，待测。

            （3）培养物：向培养物中加入2ml生理盐水，室温孵育1小时（期间不时旋涡混合）后2500转/分离心10分钟，取上清待测。

（4）按相关文献提取后，取上清液待测

3．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

4．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为（1800ng/L ，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L ， 150ng/L）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算

  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．  请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．  严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准

6．底物请避光保存。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8．本试剂不同批号组分不得混用。

9. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

检测范围：

100ng/L – 2000ng/L

规格：

96人份/盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月

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