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    夹心ELISA（Sandwich ELISA）总体上可以分为两种：直接夹心ELISA和间接夹心ELISA。 
    直接夹心ELISA：直接夹心ELISA又分为双抗夹心ELISA和双抗原夹心ELISA。
    双抗夹心ELISA的方法是：将种抗体（捕获抗体）包被在固相载体上，封闭后加入待检抗原，温育后加入第二种抗体（检测抗体），捕获抗体和检测抗体可以是针对不同表位的两种单抗，也可以是针对同一抗原的一种单抗与一种多抗，但是检测抗体需要经过酶标。
    双抗原夹心ELISA的原理和操作与双抗夹心基本相同，不同的是包被的是抗原，待检对象是抗体，然后加入酶标抗原，再加底物显色。直接夹心ELISA的原理对于双抗夹心ELISA，待检对象必须包括两个或者两个以上的表位，否则检测抗体无法与待检抗原结合，例如半抗原和小分子抗原都是不能用双抗夹心ELISA检测的。
    对于双抗原夹心ELISA，其操作与间接ELISA基本相同，但利用特异性的抗原代替酶标二抗，所以特异性比间接法更好。另外，由于间接ELISA中使用的二抗一般只能识别IgG，而双抗原夹心ELISA中任何类似的免疫球蛋白都可以被检测出，因此双抗原夹心ELISA比间接ELISA也更灵敏。 
    间接夹心ELISA：间接夹心ELISA是基于两种不同种属来源的抗体的夹心ELISA，其原理是将一种种属来源的特异性抗体包被于固相载体上（作为捕获抗体），封闭，加入待检抗原，温育，洗涤后加入另一种种属来源的特异性抗体（非酶标，作为检测抗体），后加入酶标二抗（特异性识别检测抗体），再加底物显色。 与直接双抗夹心ELISA相比，间接夹心ELISA中引入了特异性识别检测抗体的酶标二抗，相当于整个体系的信号增加了一步放大系统，于是终的结果比直接双抗夹心ELISA更灵敏。同时，由于间接夹心ELISA中的酶标二抗仅能识别检测抗体，而不能识别捕获抗体，所以体系的特异性也得到了保障。值得提出的是，间接夹心ELISA并不是严格要求捕获抗体与检测抗体来源于同一物种，也可以是这种情形：仅用特异性的抗体的Fab片段包被固相载体作为捕获抗体，而用未经处理的同种属来源的特异性抗体作为检测抗体，酶标二抗选用只针对检测抗体的Fc段的二抗，这样的酶标二抗同样不能识别捕获抗体，从而使这种体系里的捕获抗体与检测抗体起到类似于不同种属来源的效果。间接夹心ELISA涉及的体系比较复杂，用到的试剂也比其它的ELISA复杂，但是其检测灵敏度上的优越性使它在检测那些低丰度抗原的样品中应用得十分广泛。