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紫外可见分光光度计在生物学领域的应用

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2020/5/20 10:27:52

紫外可见分光光度计在生物学的应用分析中,常见的有蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm,所以,采用光度测量模式,将仪器的波长GOTO 到蛋白质的大吸收峰波长280nm 上,测试其吸光度大小,就可完成对蛋白质的定量检测。

目前,紫外可见分光光度计的应用主要是在定量分析方面。先从生命科学领域的应用来介绍。它在生命科学中应用非常广泛。主要的是以下5 个方面。

1. 蛋白质分析工作中的应用

主要的是作蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm,所以,采用光度测量模式,将仪器的波长GOTO 到蛋白质的大吸收峰波长280nm 上,测试其吸光度大小,就可完成对蛋白质的定量检测。

2. 核酸分析工作中的应用

在核酸分析中的应用,主要是用来对核酸的定量检测;因为核酸的吸收峰在260nm。我们只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计的波长GOTO 到核酸的大吸收峰260nm 上,测试其吸光度大小就是了。

3. 氨基酸分析工作中的应用

主要是用来对氨基酸的定量检测。因为氨基酸对紫外光的主要吸收波长为230nm,所以,我们只要采用光度测量模式,将仪器的波长GOTO 到氨基酸的大吸收峰230nm 上, 就可测试其吸光度大小,从而计算出氨基酸的含量。但是,因为氨基酸分析时,一般是将它溶解在水中,而水在230 nm 附近有很多干扰吸收线,所以,在用紫外可见分光光度计对氨基酸分析检测时,要注意防止干扰的问题。
此外,还需注意:只有少数氨基酸有紫外吸收,多数氨基酸无紫外吸收或很弱,测定时要衍生化后再测。

4. 糖类分析测试工作中的应用

在糖的分析中, 主要是作定量检测。因为糖对紫外光的主要吸收波长为218nm,所以,对糖类进行分析时,只要采用光度测量模式,将紫外可见分光光度计的波长GOTO 到氨基酸的大吸收峰218 nm上,就可测试其吸光度大小,从而计算出糖的含量。

5. 多糖分析测试工作中的应用

在多糖的分析中,主要也是作定量检测。因为多糖对紫外光的主要吸收波长为206nm,所以,我们只要采用光度测量模式,将其波长GOTO 到多糖的大吸收峰206 nm 上,就可测试其吸光度大小,从而计算出多糖的含量。

但是多糖的分析难度很大。因为, 在206 nm 处的时候,光源(氘灯) 的能量已经很弱,仪器光学系统的能量输出也很低,光电倍增管的灵敏度也很低,206nm 左右的干扰也很大。所以,用紫外可见分光光度计作多糖的分析是很难的事,目前许多科学家正在研究中。

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