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其它类ELISA试剂盒步骤与原理

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2020/9/23 10:06:41

其它类ELISA试剂盒操作步骤:

1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4、甩去孔内液体,每孔其它类ELISA试剂盒加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9、在450nm波长处测定各孔的OD值。局限

10、6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。

其它类ELISA试剂盒技术原理:

(1). 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

(2). 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

(3). 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。

(4). 此时固相上的酶量与标本其它类ELISA试剂盒中受检物质的量呈一定的比例。

(5). 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。

(6). 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关, 

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