H2S含量测定试剂盒说明书微量法

注意：正式测定之前选择预期差异大的样本做预实验

规格: 100T/96S

产品内容：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 1mL×1 管，4℃避光保存。

标准品：粉剂 3mg×1 管，4℃避光保存

H2S 是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm 处有D吸收峰，通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。

天平、低温离心机、可见分光光度计或酶标仪、微量比色皿或96孔板、蒸馏水。

一、样品处理：

a. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

b. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

c. 血清（浆）：直接测定。

二、测定步骤：（取 1.5ml 离心管，按照下表操作）

d. 临用前将标准品加入1ml试剂一充分溶解则为12.5μmol /mL H2S标准品溶液，稀释100倍后为0.125μmol /mL标准品溶液

试剂一（μL）	50	50	50
充分震荡混匀

试剂二（μL）	50	50	50
充分震荡混匀
试剂三（μL）	50	50	50
充分震荡混匀
试剂四（μL）	10	10	10
12000rpm，4℃，离心 10min，取200μl上清混匀，25℃静置20min，于比色皿中，测定665nm吸光值，记为A空白、A测定、A标准。