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原代细胞的取材基本要求介绍

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2022/4/2 11:38:38
原代细胞(primary culture cell)是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究,如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA,RNA和遗传学研究等,还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。
原代细胞的培养
原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。但实际上,通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。
常用的原代细胞的培养有组织块培养和分散细胞培养。
组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上,加入培养基后进行培养。
分散细胞培养大致步骤为:
将动物组织从机体中取出离散成单个细胞(常用胰蛋白酶),置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖(注意整个过程无菌)。
原代细胞的质量取决于多个因素:组织、培养基、特别是它还与实验人员分离组织的技术息息相关。如果你对分离组织不甚精通或者很难保证组织来源地稳定性,市售的原代细胞是一种不错的选择。
细胞系培养相当成熟且普遍,但有时会得到一些难以解释的结果。想不想得到更多符合体内正常生理条件的数据?从细胞系转向原代细胞,情况一定会有所好转。原代细胞培养模拟了体内的状态,能让你获得更多这样的数据。
原代细胞的取材基本要求
(1)取材要注意新鲜和保鲜 新鲜组织易于培养成功,取材时应尽量在4~6h内能制作成细胞,尽快入箱培养,若不能即时培养,应将组织浸泡于培养液内,于4℃存放。若组织块较大,应在清除表面血、坏死组织、脂肪和结缔组织后,切碎于培养液内4℃存放,但时间不能超过24h.对于已切碎的组织或血液、淋巴组织应加入含10%二甲基亚砜的培养基,按细胞冻存方式于液氮中冷冻保存。
(2)取材应严格无菌 所取标本材料应在无菌条件下进行,为了确保无菌,对所取材料若疑有污染的可能,应将所取组织在含高浓度抗菌素(400单位/mL)甚至加入适量的***或10%达克宁液的培养液内于4℃下存放2小时以上,再用PBS洗2~3次,以确保所取材料无菌。要用无菌包装的器皿或事先消毒好的带少许培养液(内含400单位/mL抗菌素)的小瓶等便于携带的物品来取材,所取材料应避免接触有毒有害的化学物质,如碘、汞等。
(3)取材和原代细胞制作时,要用锋利的器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织,尽可能减少对细胞的机械损伤。
(4)要仔细去除所取材料上的血液、脂肪、坏死组织及结缔组织,切碎组织时应避免组织干燥,可在含少量培养液的器皿中进行。
(5)原代细胞取材时要同时留好组织学标本和电镜标本。对组织的来源、部位、包括供体的一般情况要做详细的记录,以备以后查询。
(6)取材应注意组织类型、分化程度、年龄等,一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低的较分化高的组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养。取材时应尽量选用易培养的组织进行培养。 

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