上海汉尧&熙华药业
寡核苷酸类药物的低残留分析方法
实验部分
结果讨论
获取进步
前言
寡核苷酸药是一类由10～50个碱基构成的核苷酸类化合物，可以在RNA水平调控疾病相关基因的转录及翻译过程。其分子量介于传统小分子和大分子化合物之间，结构复杂，极性大，给相关的分析及质量研究工作带来了挑战。
目前，针对寡核苷酸药物的色谱分析方法主要有阴离子交换色谱法、离子对色谱法以及毛细管电泳法等。但寡核苷酸药物易与玻璃及金属材质发生非特异吸附，导致严重的系统残留，给分析工作带来极大的挑战。近期上海汉尧联合熙华药业使用YMC-BioPro QA-F色谱柱开发了一种基于离子交换原理的寡核苷酸药物分析方法，旨在通过色谱柱及方法的优化，减少该类样品在常规色谱仪器上的非特异吸附问题。同时该方法的专属性、灵敏度、重复性优良，可以在不升级设备的前提下，直接用于寡核苷酸类药物的常规分析检测。
一
实验部分
1
样品
15-25个碱基对的短链寡核苷酸样品
（由生工生物提供）
2
仪器及条件
高效液相色谱仪 | Agilent 1260 |
检测器 | UV |
色谱柱 | YMC-BioPro QA-F (5μm, 100*4.6mm) |
YMC, P/N: QF00S05-1046WP
二
结果与讨论
1
寡核苷酸混合对照品图谱
图1.15-25BP寡核苷酸混合对照品放大图谱
（19BP和20个碱基对的寡核苷酸样品未被有效分离）
2
残留测试
图2为50μg/ml寡核苷酸样品溶液/空白溶液进样前后的对比色谱图，结果显示色谱柱及系统残留率仅为0.1%。
图2.寡核苷酸溶液和空白溶液残留对比图谱
3
重复性
图3结果表明本方法重现性和精密度良好。
图3.50μg/ml样品溶液重复性色谱图
4
灵敏度
如图4所示，通过推算，可以得知该方法的检测限和定量限约为20ng/mL和50ng/mL。
图4 0.5μg/mL样品灵敏度溶液色谱图
5
线性
如图5所示，10-50 μg/mL范围内O24的线性拟合结果，R2 ≥0.999。
图5 10-50 μg/ml线性图
实验结论
综上所述，
使用YMC-BioPro QA-F, 5μm, 100*4.6mm（P/N: QF00S05-1046WP）色谱柱开发的检测寡核苷酸方法分离能力强，且该方法专属性、精密度、工作曲线相关性等均非常优异，在常规液相设备上残留极小，可以作为寡核苷酸类药物的含量及杂质控制的优选解决方案。
关于熙华药业
熙华药业是上海熙华检测技术服务有限公司的全资子公司，可提供符合中西方注册申报要求的创新和仿制化学药物的药学CMC开发一体化服务，除此之外熙华药业还有专门的中间体和符合cGMP的原料药、临床试验用制剂生产车间。
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