实时荧光定量PCR仪是一种高效的分子生物学实验仪器，由荧光定量系统和计算机组成，可以用于测定DNA或RNA的数量和序列，在医学、生物学、农业等领域被广泛应用。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。
下面介绍实时荧光定量PCR仪的操作步骤，为广大用户提供参考。
1. 准备样品
将需要进行PCR扩增的样品进行提取和准备，如血液、组织、细胞、培养基等。对于DNA或RNA的纯度和浓度要求较高，因此需要进行质控和标准化。
2. 制备PCR反应体系
根据实验需求，制备PCR反应体系，包括PCR试剂、引物、探针、样品和反应液的比例。反应液一般包括PCR buffer、MgCl2、dNTPs、Taq DNA聚合酶和水。
3. 装载样品和反应体系
将制备好的PCR反应体系注入至PCR管中，对于多孔板，可以使用自动化的液体处理系统进行装载。将PCR管张贴在实时PCR仪的板上。
4. 设置PCR参数
在实时PCR仪中，设置PCR参数，包括反应温度、循环程序、扩增效率、目标长度等。此外，还需要设置测量周期、检测通道等。
5. 进行PCR扩增
启动实时PCR仪，进行扩增过程，从而监测PCR反应的进展和结果。实时PCR仪会在反应期间进行荧光检测和数据收集。
6. 数据分析
收集实时PCR仪得到的数据，利用相关软件进行数据分析和结果解释。可以通过热图、标准曲线、阈值计算等方式，评估PCR反应的质量和数量，从而对样品进行检测和分析。
