康宁基质基质是一种富含细胞外基质®蛋白的水凝胶。®它提取自 Engelbreth-Holm-Swarm （EHS） 小鼠肉瘤，其由层粘连蛋白、IV 胶原、硫酸乙酰肝素蛋白聚糖、内肌动蛋白/尼多原、TGF-ß、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、成纤维细胞生长因子、组织纤溶酶原激活剂和其他生长因子组成。该协议将引导您完成使用康宁基质胶进行3D生物打印的分步过程。
这种水凝胶已成功用于多种 3D 培养和组织工程应用。现在，它还可以在 平台上用于 3D 生物打印具有多种细胞系的癌症球体。将 Matrigel 基质与 3D 生物打印机相结合，可以以标准化和可重复的方式实现球状体和类器官的自动化生成。
康宁基质基质应储存在 -20°C 下。该协议已针对#354234高浓度基质胶进行了优化。其他 Matrigel 变体可能需要更新打印参数。
康宁 Matrigel 基底膜基质 （HC， #354234）， 10 mL 样品瓶
1 x 15 mL Falcon® 离心管
1 x 5 mL 注射器
1 x 注射器盖
1 x 全金属 250 μm 喷嘴
1 x Costar® 多孔板或 Falcon® 培养皿
冰桶
细胞
细胞培养基
孵化器
从-20°C中取出康宁基质基质，并在4°C的冰桶中解冻过夜;
在 15 mL Falcon® 离心管中，制备含有实验所需适当细胞数的细胞沉淀;
注：我们建议使用 2 万/mL 细胞浓度，并制备总共 5 mL 的细胞负载生物墨水。在这种情况下，您需要制备一个包含 3 万个细胞的细胞沉淀。
将CORE™打印头冷却至4°C;
将 打印床加热至 37°C，然后插入您选择的培养皿（盖上盖子），使其达到设定温度;
使用移液管，向细胞沉淀中加入 3 mL（或所需体积）的 Matrigel®，并上下充分混合以确保细胞均匀性;
注意： 使用冰桶内的管子执行此步骤，以防止过早交联。
从 5 mL 注射器中取出柱塞，并将注射器盖放在鲁尔锁上;
将冷藏的康宁Matrigel基质细胞溶液移液到注射器筒中，注射器盖朝下;
从注射器柱塞上取下黑色橡胶塞，将其放入注射器筒的开口中;
将注射器桶翻转为面朝上，确保橡胶塞不会因固定到位而脱落;
等待物料流到底部，接触橡胶塞;
取下注射器盖;
用柱塞将材料向上推，直到它在鲁尔锁针头上形成弯月面;
注意： 执行此步骤时，请防止柱塞重新连接到塞子上。
如果注射器中有气泡，请敲击枪管以确保滞留的空气流向表面;
将250μm全金属喷嘴连接到注射器上;
将注射器放入CORE™打印头中，确保尽量减少Matrigel®暴露于室温，以避免过早交联;
从下面的“打印设置”部分插入推荐的打印参数以打印您的类器官;
注意：要操作液滴分辨率（直径和体积），请查看 Printing Dots 协议;
注意：由于表面受热，Matrigel® 液滴在打印过程中会部分交联，但是，请确保不要让它们在表面上停留超过 15 分钟。15分钟后，液滴将开始变干，从而导致细胞活力降低。
将Matrigel基质液滴板放入培养箱（37°C，95%相对湿度，5%CO2） 30 分钟;
添加适量的培养基进行培养。
注意：为了获得佳打印效果，建议不要进一步稀释基质。如果您希望将更大体积的细胞与 ECM 混合，则提供 Cell-Bioink 混合方案。它包含有关如何通过用载细胞培养基稀释来混合和制备载细胞的生物墨水的说明。
注意： 查看我们的检测方案，进一步分析球状体功能。
