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BUNSEN本生分享:荧光定量PCR耗材的选择

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2024/2/18 11:04:10

  BUNSEN本生分享:荧光定量PCR耗材的选择


  PCR是分子生物学研究的基础实验,用于在短时间内将单拷贝的目标DNA序列扩增至数百万拷贝。除了选择可靠的PCR仪外,用于PCR反应的塑料耗材除考虑兼容性,还要求避免存在污染物和抑制剂,同时又具有可保障最佳PCR效果的高质量。因此,如何选择作为用户,了解如何选择PCR / qPCR耗材,显得尤其重要。

  第一步,选择通量

  根据样品数量选择通量,PCR耗材的最常见规格为:

  管:0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

  96 孔板:0.2 mL, 0.1 mL

  384 孔板:0.02 mL

  单管

  8联管

  96孔板

  384孔板

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  第二步, 选择加样体积:不同类型管,可供选择的容量体积不同。

  单管: 0.5 mL, 0.2 mL(标准), 0.1 mL(低容,或称快速)

  8联管: 0.2 mL(标准), 0.1 mL(低容,或称快速)

  96 孔板:0.2 mL(标准), 0.1 mL(低容,或称快速)

  384 孔板:0.02 mL

  “(低容)”意味着高度更低。 低容耗材更短的设计程度减少了反应体系上方的空间,降低了蒸发的影响并提高了热传导效率,因此也被称为“快速”管或板。

  第三步, 对于PCR板的选择,需要进一步根据实验类型和仪器选择裙边、切割角、颜色等。

  3.1裙边: 根据仪器加热模块类型选择

  无裙边:

  兼容绝大多数PCR仪和实时PCR仪的模块,易于剪裁,但不适用于自动化应用。

  半裙边:

  板的边缘周围具有短的边缘,加热或移液过程中提供足够的支撑,不宜变形弯曲

  全裙边:

  有覆盖板高度的边缘,适用于自动化操作

  3.2颜色: 透明或白色

  PCR板通常提供透明、磨砂或白色不同的颜色形式,以适用于不同类型PCR反应。在实时PCR的反应时,与透明耗材相比,我们更推荐使用白色塑料耗材,以实现灵敏和准确的荧光检测。

  白色耗材通过阻止荧光折射出管来提高qPCR数据的灵敏度和一致性。折射被最小化时,更多的信号被反射回检测器,从而增加信噪比(图B)。此外,白色管壁可阻止荧光信号传递至PCR仪模块,避免被吸收或不一致地反射荧光信号,从而使重复实验中的差异降至低。在极少数情况下,如果荧光探测器由于白色孔的信号反射增强而过饱和,可以使用磨砂孔替代。

  3.4 切角

  切角是对PCR板的一个角缺失,取决于所需要适配的仪器。切角可能位于96孔板的H1,H12或A12位置,或384孔板的A24位置

  3.5品牌选择

  市场上有许多品牌和厂家提供PCR耗材,选择时需要考虑哪些因素呢? PCR耗材品质由包括原料、无污染、一致性等决定。

  1. 原料:Thermo Scientific选用优质的全新医用级聚丙烯原料

  2. 生产环节:十万级洁净车间生产,无RNase、DNase和外源DNA污染

  3. 批间一致性:遵循严格的生产标准和检测标准,由资深专家使用的设备进行生产,确

  保批间一致性和可追溯性,确保用户获得可靠PCR实验数据。

  第四步,选择正确的PCR膜

  PCR板选好后,还需要选择一张好的PCR膜来密封,才能保证获得准确可靠的PCR数据,这对实时PCR尤其重要!

  我们的Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘性封口膜(货号AB1170)产品采用压力敏感密封设计。只有在施加压力的情况下,这种非粘性粘合产品才可以粘合到孔的边缘上。其只在需要粘合的位置产生良好的密封效果,使孔开口位置变得超透明,实现的荧光信号传输。

  强效压敏粘附,可产生牢固的粘合效果,以尽量减少蒸发,使每个样本保持较高的PCR效率

  其光学透明度可用于qPCR及其他荧光应用

  一致的封口厚度和透明度,确保整块板信号传输相等

  可剥离,剥离后平板上无粘性残留

  膜两端无粘性,轻松进行密封和去除操作

  适用温度范围:–80°C至110°C

  PCR耗材 本生一直视质量控制为企业的生命,追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承:遵纪守法,严于律己,宽仁以待,敢于承担的企业精神作为标准,以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场,较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢,是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。

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