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噬菌体库展示技术——艾柏森生物

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2024/3/25 17:28:33

噬菌体展示技术(Phage Display Technology)是一种重要的蛋白质工程技术,通过将外源蛋白或多肽插入噬菌体表面蛋白的基因中,并通过噬菌体复制过程中的表达展示在噬菌体表面,从而实现对蛋白质库的筛选和分析。以下是噬菌体库展示技术的详细介绍:

1. 噬菌体选择

 

单链噬菌体(Phage): 选择单链噬菌体作为展示平台,因其具有简单的遗传学特性和易于操作的优点。

 

 

遗传工程噬菌体: 将外源DNA插入噬菌体基因组中,构建遗传工程噬菌体库。

 

2. 插入外源DNA

 

插入位点: 在噬菌体表面蛋白基因的适当位点插入外源DNA,使外源蛋白或多肽与噬菌体表面融合。

 

 

连接技术: 使用PCR扩增、限制性酶切和连接等技术将外源DNA插入到噬菌体基因组中。

 

3. 噬菌体复制与表达

 

感染宿主细菌: 将构建好的遗传工程噬菌体感染宿主细菌(如大肠杆菌)。

 

 

复制与表达: 噬菌体在宿主细胞内复制并表达外源蛋白或多肽,同时将其展示在噬菌体表面。

 

4. 构建蛋白质库

 

多样性: 插入不同的外源DNA序列,构建具有多样性的蛋白质库。

 

 

规模化: 根据实验需求,构建规模化的噬菌体蛋白质库,包含大量不同的外源蛋白或多肽。

 

5. 筛选与分析

 

生物筛选: 利用目标蛋白与配体的特异性结合,通过生物筛选(如ELISA、免疫沉淀等)筛选出具有特定功能的噬菌体克隆。

 

 

细胞筛选: 将蛋白质库与细胞相互作用,通过细胞表型的改变或信号通路的激活等方式筛选目标蛋白。

 

6. 应用领域

 

抗体筛选: 用于抗体库的筛选和优化,发现特异性、高亲和力的抗体。

 

 

蛋白质-蛋白质相互作用: 研究蛋白质相互作用网络,发现新的生物学相互作用。

 

 

药物研发: 发现与药物靶点相关的蛋白质,用于药物研发和靶向治疗。

 

噬菌体库展示技术作为一种高效、灵活的蛋白质工程技术,在生物医药研究、蛋白质相互作用分析和新药开发等领域发挥着重要作用。其不仅可以用于蛋白质的筛选与分析,还为基因工程、生物学研究和药物设计提供了强大的工具和平台。

 


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