技术文章

产品名称：NEB rCutSmart缓冲液(B6004V)现货供应

产品货号：B6004V

产品品牌：NEB

产品简介：

NEB rCutSmart缓冲液(B6004V)适用于各类限制性内切酶，超过 210 种限制性内切酶都能在rCutSmart缓冲液中表现出百分之bai的活性，从而极大地简化了实验过程中双酶切反应的准备工作。rCutSmart 缓冲液中富含重组白蛋白，因此可减少试管数量和移液操作步骤。此外，许多DNA修饰酶也能在rCutSmart缓冲液中保持100% 活性，因此无需进行后续纯化。

此外，New England Biolabs为每种限制性内切酶提供了一种采用颜色标记的10X NEBuffer 反应缓冲液，以确保酶保持最佳（100%）活性。New England Biolabs的大多数酶均配有四种标准NEBuffer 缓冲液之一。这些缓冲液中含有重组白蛋白。

使用方法：

同时用两种限制性核酸内切酶消化 DNA 底物（双重消化）是一种常见的省时程序。选择最hao的NEBuffer以提供优化酶活性的反应条件，并避免与某些酶相关的星形活性是一个重要的考虑因素。每种酶都配有最佳的 NEBuffer，以确保 100% 的活性。NEBuffer 组合物列在缓冲区页面上。

设置双消化

· 可以在 rCutSmart 缓冲液™中设置含有 NEB 限制性内切酶的双重酶解。否则，请选择对两种酶都具有最大活性的 NEBuffer。如果对星体活性有顾虑，请考虑使用我们的高保真 （HF®） 酶之一。

· 根据推荐方案设置反应。任何反应中甘油的最终浓度应小于5%，以尽量减少星活性的可能性。例如，在50μl反应中，加入的酶的总量不应超过5μl。 NEBcloner也可用于确定推荐的双消化条件。

· 如果需要两种不同的孵育温度，请选择最佳反应缓冲液并相应地设置反应。加入第一种酶并在所需温度下孵育。然后，加热灭活第一种酶，加入第二种酶并在推荐温度下孵育。

· 根据酶在非最佳NEBuffer中的活性等级，可以调整单位数或孵育时间，以补偿较慢的裂解速率。限制性内切酶性能图表可指示星形活性是否是次优缓冲液的问题。

设置顺序消化

· 如果没有两种酶表现出>50%活性的缓冲液，则可以进行顺序消化。

· 使用推荐缓冲液中盐浓度zui低的限制性核酸内切酶设置反应并孵育完成。

· 调整反应的盐浓度（使用少量浓盐溶液）以近似第二限制性核酸内切酶的反应条件。

· 加入第二种酶并孵育以完成第二反应。

· 或者，可以使用离心柱在第二次反应之前分离DNA。

产品选购：

天津益元利康生物科技有限公司，提供NEB rCutSmart缓冲液(B6004V)现货供应，欢迎选购！