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荧光显微镜技术简介

北京京百卓显科技有限公司

2012/2/21 16:36:06

 

荧光显微镜技术简介
   荧光显微镜是荧光显微检测的工具,它是光学显微镜的—种。除了具有光学显微镜的基本结构和光学放大作用外,基于荧光的特性,还具备以下*的功能:①提供足够能量的能激发出荧光的光源;②有着适应不同物质所博激发光涪的一组滤色片,从光源中选择合适的激发光谱,使析出的光谱与该物质的吸收光谱重合,以期望获得zui大的荧光;③还要建立一套截止滤色片,它使所需观察的荧光进入系统成像,而将其余的光波,包括发射光阻挡在外,用来提高图像的衬度;④放大的光学系统应适应荧光的特性,zui终获得既能观察又能摄影的高亮度、高分辨力的良好衬度的荧光图像;⑤仪器的安全性。应用汞灯要防止紫外线的泄漏和汞灯的爆炸,保证电器安全。
生物荧光显微镜基本形式有两种:透射式和落射式。透射型虽然在低倍时能获得良好的
高反差的成像,但与落射型相比荧光像较暗,故现在多使用落射型荧光显微镜。
     荧光吊微镜光源的选择取决于所需检测的荧光物质的吸收光谱,荧光色素的平均吸收波长峰值从紫外(340 nm)到黄绿光(595nm)。具有这些光谱的强光源有超高压汞灯、超高压佩灯和大功率的卤素灯。
     滤色片是荧光显微镜的关键部件,在荧光显微镜中按其功能可分为激发滤色片和截止滤色片两类。
    激发滤色片的功能是从光源中分析出所需的特定光谱,以激发标本产生荧光。激发滤色片一般按激发光谱分为:紫外区(uv)波段在340—380 ;紫蓝区(Y)波段在390—460nm;蓝光区(B)波段在460—500 nm”;绿光区(G)波段在500—570 nm,黄光K(Y)波段在570—595nm;
    截止滤色片的功能是仅把标本上发出的荧光透过成像,而将其他光阻挡不参与成像,一般激发滤包片安置在紧靠光源处,而截止滤色片在物镜与门镜之间。
免疫荧光小应用zui广的荧光色素是FIFC,它的吸收波段为450—540 nm,峰值在490nm,发射光波在500—550 nm,峰值在520 nm附近,呈黄绿色,峰值间隔30 nm:当选用短波通过十涉滤色片如KP90时.仅允许420—510 nm区域光透过,这种滤色片在透过区域内有*的透射比(>80%);在非透过区如>490 nm的长波透过率很低,因此能够亩效地消除长波方面的杂散激发光。
本文章来自北京京百卓显科技有限公司编辑部杨柏松 (专注显微镜www.bjmicro.com 禁止转载)

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