ELISA法的免疫反应部分中，抗原-抗体的亲和力、抗原和半抗原的性质、测定方法的实验条件、酶标记物的性质等因素均会影响反应的敏感性。在酶学反应部分中，酶的浓度、底物的浓度、反应pH、温度、酶的抑制剂和激活剂等因素也影响反应的敏感性。下面让我们一起来看看ELISA实验的注意事项吧！
需要注意以下几点：
(1)待测样品溶液中不能存在与标记酶相同的酶、底物、酶抑制剂和其他干扰因素，以防止干扰作用。
(2)聚苯乙烯反应板测定时，溶液宜垂直滴入凹孔中间，相继加入的溶液都覆盖相同的载体表面积。在吸附、温育和洗涤等操作中应避免剧烈震摇、搅拌等，以保证恒定的吸附容量。在洗涤操作中，由于聚苯乙烯反应板凹孔容量小、孔间距离近，故洗涤时要注意每次加入的洗涤液量既要达到洗涤充分又要避免相邻孔内液体互相污染。
(3)在ELISA中血清阴性对照的显色反应常常是因酶结合物与固相之间的非特异性吸附所致，可在酶结合物稀释时中加入去污剂(如Tween-20)或非特异性蛋白质(牛血清白蛋白)，减少酶结合物的非特异性吸附作用。稀释的酶结合物置于室温条件下过久，会影响底物的显色反应，所以酶结合物应在使用前稀释。
(4)一些底物如OPD和TMB在暗处稳定，底物溶液要现用现配，酶促反应时注意避光。某些含苯环的底物有致畸变作用或致癌作用，使用时要多加小心，测定完数据后，收集反应溶液，集中处理，不要流入下水道。
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