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EMC-500A高速逆流色谱仪分离实验过程详解

北京艾美林科技有限公司

2010/1/26 16:00:58

 

EMC-500A高速逆流色谱仪
分离邻二苯酚,间苯二酚流程
 
一.           仪器条件
 
1.     EMC-500A高速逆流色谱仪
转向:正向(正向定义:见仪器标识);转速:800转/分钟
2.     8823B紫外检测器
 波长254纳米;灵敏度2A
3.     EMC-P10泵
流量2毫升/分钟(压力保护值设定1mpa)
4.     3057记录仪
纸速:6厘米/小时;量程:100mv
5.     进样器:2毫升
 
二.             连接管路

连接顺序:溶剂—滤头—泵入口(下)—泵出口(上)—进样器入口(“接输液泵”)—进样器出口(“接制备柱”)—主机管路入口(标记端)—主机管路出口—检测器入口(下)—检测器出口(上)—收集瓶(初期建议使用100ml量筒,以辨认液体分层)
 
注意:用手拧接头组件(不提倡使用扳子等工具,以免超负荷损坏)连接管路完成后,泵入蒸馏水以检查管路有无液体异常泄露。
 
三.           溶剂系统:共1000毫升
 
1.     正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/1/0.8(V/V)(所用溶剂均为分析纯)
2.     固定相:上相 流动相:下相
3.     样品:邻二苯酚(化学纯,市售厂)
4.     间苯二酚(分析纯,市售)
 
四.           操作过程
 
1.     配制溶剂系统
    按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8(V/V体积比)共1000ml,用量筒至一玻璃容器内,脱气,分层分离。——在实验开始前1天,将溶剂配置在同一玻璃容器(推荐磨口三角瓶)内混合震摇,注意排气,超声波脱气30分钟后,移液至同一分液漏斗密闭静置饱和。在实验开始前1小时内,将两相溶剂分开放置在两玻璃容器内,并密闭静置,防止蒸发。
 
2.     样品制备
    在一玻璃容器内将预先使用天平称量的80毫克邻二苯酚和100毫克间苯二酚混合物溶于3毫升下相中,超声波脱气(溶解至溶液内无固体,如有固体应过滤,以防止塞管路),并密闭静置,防止蒸发。

3.     连接泵
    将泵入口(下)连接的滤头放入固定相(上相)瓶内,*浸入液面以下闭合泵电源开关,启动泵,设定压力保护值1mpa(兆帕)。按ph键。
    设定流量:9.99ml分钟,按L键,按999,使数字显示为999,按run键。用9.99ml/分钟流量向主机内泵入固定相(上相),注意管路内不要有气体,至充满分离柱柱体,,固定相从主机出口流出5分钟后,停泵——按PAU键。迅速将泵入口(下)连接的滤头换放入流动相(下相)溶剂瓶内,*浸入液面以下。注意管路内不要有气体。

4.     检查主机状态与管路状态。
    仪器主机放置在平稳、坚实、安全的水平平面上,仪器地脚与平面间放置厚约3毫米的隔震硬橡胶板,仪器地脚调实。环境:湿度10—30摄氏度,通风良好,禁止无关人员停留与过往。远离易燃易爆物品和场所。
打开主机上盖,润滑主机解绕管,加洁净润滑油3-4滴,轻触机内运动部分使其正向旋转3-4圈,以检查有无异常。无异常,关盖锁紧。

5.     调整紫外检测器
    详见紫外检测器说明书调整紫外检测器波长到254nm:(在切断市电的情况下)解脱紫外检测器光源插头座,旋开光源固定螺母,取出空心阴极灯,用紫外检测器工具将挡圈选下,取出(出厂时已装上的)280nm滤光片。装入透紫玻璃,将挡圈旋紧,再将灯放回原处,旋紧光源固定螺母,接好光源插头座。将波长转换开关置于254处。小心安妥保管280nm滤光片,并做标记(注:在不使用280nm灯时,均应/可置于254处——衰减大)紫外检测器-在逆流色谱仪主机运转开始前40分钟通电预热。

6.     启动主机:
    将后面板转向开关置于“正向”处、闭合速度控制其电源开关:缓慢调节多圈电位器旋钮调整控制器指针(顺时为加速,逆时为减速),显示表指针预定位置,一般取转速800转/分钟。
    泵入流动相:设定流量:2.0ml/min。按L键,按200,使数字显示为200,按run键。
    注意:在泵入流动相的全部时间内,要求保证泵入口(下)连接的滤头始终*进入流动相(下相)溶剂瓶内液面以下。

7.     调整紫外检测器灵敏度
    闭合紫外检测器电源开关,预热完成后,当流动相进入紫外检测器吸收池中,将量程范围调节钮旋至T档,调节透过率调节旋钮,使数字显示5(mv)-量程低点。T透过率。A吸收度(透过率负对数),数值是以A档为基准的倍率。紫外检测器与记录仪信号连线时应红线对红插座,黑线对黑插座。


8.     闭合记录仪电源开关
    设定记录仪:纸速:6厘米/小时。量程:100mv。基线,5mv。并放下记录笔。

9.     进样(将样品液体装进到进样器定量管内)
    调整进样器状态使手柄在“进样”标记位。用洁净针筒针头吸取全部样品液体,排除针筒、针筒针头内全部气体,旋松进样器的“进样器”标记处管路口处“?”筒的针头刺入并连接在进样器的“进样器”标记处管路口上。用手旋紧进样器的“进样器”标记处管路口处“外六方金属体”
推进针筒内全部样品液体到进样器定量管内(使液体从进样器“溢出”标记处管路溢出,以便排除管路气体)。
    在样品进入定量管内到样品进入柱管前的期间内,注意不要使样品流失。!!

10. 进样/接柱
    在流动相从检测器出口流出后,将进样器状态调整至“接柱”标记——进样:进样器定量管内样品液体接进到主机分离柱管系统内。进样后约3小时第二峰出完。
    在1进样同时,2启动记录仪走纸按键,3放下纪录笔,4调整记录仪状态至走纸,5按回零/测量按键两次,在记录纸上做标记,并确认处于测量状态。6检查泵运行状态,确认泵出的液体正常流出。7纪录实验各项参数,时间,状态等。
    收集检测器出口流出液体。以环保方式处理和保管废弃液体。建议:液体暂装容器采用透明无色玻璃,并适当密闭

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
图 EMC-500A-HSCCC分离间苯二酚和邻苯二酚的色谱图
 
 
五.           试验结束

逆时针调整多调速器圈电位器旋钮归零,关断逆流色谱仪调速器开关,主机运转停止。管段记录仪,紫外检测器电源等开关。因仪器系统能耗不大,建议各仪器市电插头集中就近插放。
实验完毕,立即使用5-10kg压力的洁净空气排出逆流色谱仪主机仪器内大部分液体,洁净空气由主机入口(标记端)管路接入。然后大流量泵入洁净液体冲洗仪器内残留液体。冲洗过程中多次断续切换进样器状态,以冲洗进样器。
主机内残留液体冲洗完毕,切断各仪器电源。针头可留在进样器的“进样器”标记处管路口处,将针管脱离取下。
保留逆流色谱仪主机内洁净液体,待近期下次使用。如近期(1个月以内)不使用逆流色谱仪,需使用洁净空气排出逆流色谱仪主机仪器内全部液体,使用压力0.5-1Mpa,持续时间≧40分钟,保留泵内洁净液体,将泵的液体管路出入口均置于同一容器液体内,待近期下次使用。

 
六.           提示与警告

慎用或禁用:
1. 含有盐类的液体溶剂系统。
2. 含有易于结晶、沉淀、粘稠的液体溶剂系统与样品。——上述溶剂系统极易于阻塞工作管路,造成仪器的*性损坏。
3. 当工作鼓内缺少液体时禁止仪器运转。

提示:
1.       寒冷的地区/季节/室内,建议给液体和仪器适当温度,以避免内部结晶。
2.       每一次泵入液体前,务必检查/设定泵的压力保护值1Mpa.
3.       变换溶剂系统后,检查/调整平衡。出厂时的配重溶剂系统比重r=1。
4.       HSCCC是高速旋转类仪器,请用户对操作者给以明确的安全使用指导。
5.       会影响记录曲线美观的因素:在压力和温度变化时,液体和样品内析出的气体。样品颜色。

保管:仪器存放于0℃以上的洁净通风室内。

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