技术文章

1、转染前细胞的处理（以24孔板培养为例）：
贴壁细胞：在转染前一天，在24孔板内铺上0.5×105细胞，500ul无抗生素培养基培养一天，到转染时使细胞达到80％～90％的汇合率。
悬浮细胞:在制备混合物前，将4—8×105细胞用无抗生素培养基培养铺铺于24孔板内。
2、转染方法（以质粒DNA转染为例）
2.1、将DNA质粒溶于50ul无血清的Opti－MEM Ⅰ Reduced Serum Medium中。混合均匀。
2.2、将适量Lipofectamine 2000溶于50ul无血清的Opti－MEM Ⅰ中，混合均匀。在室温下孵育5分钟（在25分钟内进行步骤c）。
2.3、孵育5分钟后，将上述两种混合物混合（总体积100ul）。轻轻混合均匀在室温下孵育25分钟（可能出现雾状沉淀）。复合无在室温下六小时内稳定。
2.4、在24孔板中每孔加入100ul的复合物以及适量培养基。十字法混合均匀。
2.5、细胞在37。C CO2培养箱中培养18－48个小时后，测量转染效率。在加完复合物4－6小时候可更换培养基。
3、转染注意事项
3.1、转染严格来说，每种细胞的条件是不一样的，如果实验时，不能确定*转染条件，请在细胞实验组共享文件夹查找类似细胞的转染方法；
3.2、转染结果的好坏，与DNA质量密切相关，务必在实验之前对去内毒素质粒DNA的质量进行严格鉴定，至少采用以下两种方法：琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度检测，如果有条件，可对质粒DNA去内毒素质量的进行检测。