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蛋白酶K Proteinase K

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北京博凌科为生物科技有限公司

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北京博凌科为生物科技有限公司是核酸分离纯化及多聚酶链式反应相关试剂盒的生产厂家。产品广泛应用于生命科学研究,并得到广大用户的*好评。博凌科为公司致力于为生命科学研究人员提供简单、易用、值得信赖的分子生物学和生物化学试剂类产品以及专业的技术服务。同时公司针对生物试剂行业规模小,标准低,批次之间产品稳定性差的弊端,引入生物医药公司风险投资作为战略合作伙伴,将生物医药级的规模生产设备、工艺、流程等引入科研试剂领域,提供具有医药级质量标准的科研试剂。公司未来将立足生物技术前沿领域,不断推出质量稳定、价格合理的新产品,与广大科研工作者携手为中国生命科学发展不断努力。



部分优势的产品和技术平台介绍:

•各种样品核酸纯化,尤其是困难特殊样品如多糖多酚含量丰富植物、粪便、土壤等的核酸分离。

•荧光定量PCR,反转录荧光定量PCR检测。

•大规模发酵罐表达医药级设备纯化科研工具酶,包括各种DNA聚合酶、T4 连接酶、各种突变改造 反转录酶、RNA酶抑制剂等。

•PCR产物克隆,TA克隆连接。

•Western Blot 全套相关试剂和服务。

•转染级、工业级、医药级大规模质粒生产。

•各种蛋白、细胞因子、酶等表达纯化小试、中试、放大。

详细信息

 蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中纯化得到。据资料显示:该酶有两个ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以,蛋白酶k消化过程中通常加入edta(以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA(ph8.0)至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2+。   蛋白酶K,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,还具有降解天然蛋白质的能力,因而它应用很广泛,包括制备脉冲电泳的染色体DNA,蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内(pH 4-12.5)均有活性。   *反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。   蛋白酶K配制标准:20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K):将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

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