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大鼠D二聚体（D2D）ELISA检测试剂盒
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关于我们
上海信帆生物科技有限公司（Shanghai Xinfan Biotechnology Co.,Ltd）成立于上海，是一家集“产品研发、销售、技术服务”为一体的生物公司。经过多年的努力发展已成为专业供应各类生物科研用品的公司，长期专注于生物领域，旗下代理产品种类众多。信帆生物秉承以产品质量为根本，以市场需求为导向，以为客户创造价值为己任的精神，坚守产品质量的可靠、稳定，并严格秉承“专业、诚实、守信、创新”全过程、多方位的质量监控检测，从包装到品质，从产品到服务，每个环节，我们都严控质量关，力求为客户提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品。我们供应的产品包括elisa试剂盒，生化试剂盒，动物血制品，抗体，质控品，干扰物质，抗原，生化试剂，实验耗材等10万余种类，公司长期致力于为客户提供RT-PCR检测、病理染色、免疫组化检测、Western blotting检测、生化检测、ELISA检测、放免检测等一系列实验代测服务。产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域。
主营业务
主营产品: 质控品，干扰物质，抗体抗原，elisa试剂盒，动物血制品，生化试剂盒等。实验代做服务：HE染色/特殊染色/技术服务、免疫组化实验服务、Western blotting实验服务、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR）、酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测、RACE、全基因合成、线粒体测序、基因克隆、定点突变、染色体步移、基因组全序列获取、环境微生物多样性、微生物基因组测序、微生物菌种鉴定、甲基化分析服务等。经销品牌：Abcam、Sigma、CST、Amresco、BD、Enzo、Bio-Rad、merck、Santa Cruz、Jackson、R&D、Merck Millipore、gibco、hyclone、Bio-World、NEB、Tocris、Corning、Axygen等等。
核心价值
公司本着以专业的产品、合理的价格、完善的服务，为客户提供更好的，更专业的技术服务和科研产品。公司以“质量为重，专业服务”的原则，致力于为用户提供高性价比的试剂盒和检测服务，提供全程咨询和技术支持，包括确定测定指标、选择合适的试剂盒规格、试剂盒保存、预测定和测定结果分析等。高质量的产品，让用户省心；专业的检测服务，让用户省力；优惠的价格，让用户省钱。信帆生物为广大用户提供各类检测服务，帮助老师轻松获得了真实可靠的检测数据，显著提高了用户的科研效率，为其发表高水平的研究论文提供了坚实的平台；为研究生按时毕业，导师顺利结题、申请新课题和晋升职称提供了实实在在的帮助，公司客户遍布国内各大学、医院、研究所、卫生防疫、生物公司等单位。
详细信息
产品名称：大鼠D二聚体（D2D）ELISA检测试剂盒
英文名称：Rat D2D (D-Dimer) ELISA Kit
货号：XFR30082
规格：48T/96T
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
用途：本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠D二聚体（D2D）的含量。
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠D二聚体（D2D）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠D二聚体（D2D）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
4. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织-剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成
名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 无 |
标准品 | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 | 无 |
样本-稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
底物A | 6mL | 3mL | 无 |
底物B | 6mL | 3mL | 无 |
终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
注：
1. 标准品浓度依次为：800、400、200、100、50、0 ng/mL
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本-稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
操作注意:
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。所有液体组分使用前充分摇匀。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果样本可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂的准备
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
2. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 待测样本孔先加待测样本50μL，空白孔不加。样本不足的情况下，上样量最少10μL。操作方法：待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本-稀释液40μL。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算:
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
试剂盒性能
1. 检测范围：25 ng/mL - 800 ng/mL。
2. 灵敏度：最-低检测浓度小于1.0 ng/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15%
其他注意事项:
1. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。
2. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商或者不同批次的产品。严格遵守试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。
3. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
5. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。
6. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。
操作安全须知:
1) 所有的化学试剂理应被认为具有潜在危害,任何的操作都必须提前做好实验防护。在操作试剂盒或处理样本的区域请不要饮食。
2) 推荐只有经过良好实验室培训的工作人员方可操作本试剂盒。操作时请佩戴合适的防护设施，例如白大衣、实验手套、安全眼镜等。
3) 请不要让试剂或样本接触皮肤、眼睛和粘膜等身体部位。如不慎接触，请立即用大量清水清洗。
4) 试剂盒中的终止液为酸性溶液，在使用终止液时，请佩戴防-护服，做好防护眼睛、手及面部等的措施。
5)检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照实验室规定进行处置，严禁随意丢弃。
6)试剂盒的液体组分中，含有防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟雾或与皮肤接触。底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟雾。戴上防护手套，实验完成后彻-底洗手。
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
大鼠D二聚体（D2D）ELISA检测试剂盒
