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猪乙型脑炎病毒IgG抗体检测试剂盒
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三、预期用途 日本乙型脑炎又名流行性乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种急性人兽共患传染病。可引起猪乙型脑炎,主要特征为高热、流产、死胎和公猪睾丸炎。
本试剂盒用于检测猪血清、血浆中猪乙型脑炎病毒抗体,可用于猪乙型脑炎病毒疫苗免疫效果评价。
四、试剂盒原理
本试剂盒系由预包被猪乙型脑炎病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪乙型脑炎病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有猪乙型脑炎病毒抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有猪乙型脑炎病毒抗体。
五、试剂盒组成
酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照
六、储存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期为12个月。
包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。
七、适用仪器 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。
操作步骤
一、样品准备
1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,*需置-20℃保存。
2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释(如5μl血清加入195μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
二、检验方法
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀,置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
结果分析
一、参考值
实验正常的情况下,阴性对照≤0.10,阳性对照≥0.6。
二、检验结果的解释
1.样品A值≥0.38为阳性;样品A值在0.2到0.38之间为可疑;样品A值<0.2为阴性。
2.本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足,建议补打相应疫苗。