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免疫荧光单标双色扫描全套（芯片）
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关于我们
上海信帆生物科技有限公司（Shanghai Xinfan Biotechnology Co.,Ltd）成立于上海，是一家集“产品研发、销售、技术服务”为一体的生物公司。经过多年的努力发展已成为专业供应各类生物科研用品的公司，长期专注于生物领域，旗下代理产品种类众多。信帆生物秉承以产品质量为根本，以市场需求为导向，以为客户创造价值为己任的精神，坚守产品质量的可靠、稳定，并严格秉承“专业、诚实、守信、创新”全过程、多方位的质量监控检测，从包装到品质，从产品到服务，每个环节，我们都严控质量关，力求为客户提供更好的、更专业性的技术服务和科研产品。我们供应的产品包括elisa试剂盒，生化试剂盒，动物血制品，抗体，质控品，干扰物质，抗原，生化试剂，实验耗材等10万余种类，公司长期致力于为客户提供RT-PCR检测、病理染色、免疫组化检测、Western blotting检测、生化检测、ELISA检测、放免检测等一系列实验代测服务。产品涉及分子生物学、细胞生物学、免疫学等生命科学的各个领域。
主营业务
主营产品: 质控品，干扰物质，抗体抗原，elisa试剂盒，动物血制品，生化试剂盒等。实验代做服务：HE染色/特殊染色/技术服务、免疫组化实验服务、Western blotting实验服务、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR）、酶联免疫ELISA、生化测试、液相气相检测、RACE、全基因合成、线粒体测序、基因克隆、定点突变、染色体步移、基因组全序列获取、环境微生物多样性、微生物基因组测序、微生物菌种鉴定、甲基化分析服务等。经销品牌：Abcam、Sigma、CST、Amresco、BD、Enzo、Bio-Rad、merck、Santa Cruz、Jackson、R&D、Merck Millipore、gibco、hyclone、Bio-World、NEB、Tocris、Corning、Axygen等等。
核心价值
公司本着以专业的产品、合理的价格、完善的服务，为客户提供更好的，更专业的技术服务和科研产品。公司以“质量为重，专业服务”的原则，致力于为用户提供高性价比的试剂盒和检测服务，提供全程咨询和技术支持，包括确定测定指标、选择合适的试剂盒规格、试剂盒保存、预测定和测定结果分析等。高质量的产品，让用户省心；专业的检测服务，让用户省力；优惠的价格，让用户省钱。信帆生物为广大用户提供各类检测服务，帮助老师轻松获得了真实可靠的检测数据，显著提高了用户的科研效率，为其发表高水平的研究论文提供了坚实的平台；为研究生按时毕业，导师顺利结题、申请新课题和晋升职称提供了实实在在的帮助，公司客户遍布国内各大学、医院、研究所、卫生防疫、生物公司等单位。
详细信息
免疫荧光单标双色扫描全套（芯片）
服务介绍：
抗原抗体的结合非常特异。免疫荧光单标是用与目标蛋白对应的特异性的第一抗体去孵育组织切片，然后再利用对应的带有荧光染料的第二抗体与第一抗体结合，在组织切片扫描仪或者荧光显微镜下用荧光染料对应波长的光去激发染料发出荧光进而将目标蛋白通过间接标记的方式显示出来。也可以利用TSA技术进行荧光标记，有信号放大的作用。TSA技术主要原理为用HRP标记的第二抗体与第一抗体结合后，再孵育荧光标记的酪胺（TSA），TSA在二抗上偶联的HRP与H2O2的作用下变为活化的酪胺并附着在目标蛋白周围的蛋白酪-氨酸残基上，在组织切片扫描仪或者荧光显微镜下用荧光染料对应波长的光去激发染料发出荧光进而将目标蛋白通过间接标记的方式显示出来。利用TSA技术也可进行多种蛋白同时标记，每轮标记都按一抗-二抗-TSA的顺序对相应抗原进行标记，每轮染色只需改变TSA荧光染料种类即可实现多个靶标用不同荧光染料进行共同标记。
组织芯片（细胞芯片）是将许多不同个体组织或细胞标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上，进行同一指标的原位组织学研究。客户提供供体组织，细胞或蜡块，在芯片制作过程中首先将供体组织，细胞包埋成单个供体蜡块，按照客户要求用取样针从供体蜡块上将目的区域的组织取出并按照客户要求将不同的组织点排列在事先制作好的受体蜡块上。然后将排列好的组织点与受体蜡块进行融合成一个蜡块再进行后续的切片。切出来的片子同一载玻片上包含了客户需要同时观察和对比的所有组织，这样的切片用于后续进行染色或免疫组化/荧光操作即可将载玻片上所有的组织点条件控制一致，这样比一个组织一张切片操作起来更方便快捷，组织间对比更明显结果更可靠。
切片数字扫描是通过控制显微成像系统和切片以一定的规则运动，采集多张连续的高分辨率显微图像再无缝拼接生成一张高分辨率的组织切片全景图像。该图像包含了玻片上所有的信息，可在电脑上用浏览软件任意放大和缩小，任意部位观察采图，是真正脱离显微镜的阅片方式。通过在扫描仪上加载与免疫标记时荧光染料匹配的最佳激发波长和发射波长的滤光块，获取不同荧光通道的图像。可单通道，多通道任意组合浏览并按需采图。切片扫描尤其适用于芯片的浏览观察和结果比较。
名称 | 规格 |
免疫荧光单标双色扫描全套（芯片） （包含免疫荧光染色和扫描） | 张 |
送样运输要求：
1、组织样本放置于10倍样本体积的通用型组织固定液中固定24h以上，常温保存运输石蜡包埋。置于固定液内的组织切勿冷冻结冰，切勿固定时间过长。
2、石蜡切片常温保存运输。
实验大体流程：
荧光二抗法：
石蜡切片脱蜡至水——微波抗原修复——画圈血清封闭——孵育一抗——孵育荧光二抗（可根据需求选择不同荧光染料标记的二抗）——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像。
TSA法
石蜡切片脱蜡至水——微波抗原修复——画圈双氧水封闭——血清封闭——孵育一抗——孵育HRP二抗——孵育TSA（可根据需求选择不同荧光染料标记的TSA）——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像。
荧光二抗法实验具体流程：
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将石蜡切片放入环保型脱蜡液I 10min-环保型脱蜡液II 10min-环保型脱蜡液III 10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-无水乙醇Ⅲ 5min-蒸馏水洗。
2、抗原修复：组织切片置于盛满抗原修复缓冲液（PH 6.0 柠檬酸；PH 9.0 EDTA；PH 8.0 EDTA）的抗原修复盒中于微波炉内进行抗原修复。维持缓冲液沸腾10min左右，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min(修复液种类和修复条件根据组织来确定）。
3、画圈血清封闭：切片稍甩干后用免疫组化笔在组织周围画圈（防止试剂流走），切片平放于透明湿盒滴加血清室温封闭30min。一抗是山羊来源用10%兔血清封闭，一抗其它来源的用3%BSA(GC305006)封闭。
4、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加用无菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于透明湿盒内4°C孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。
5、加对应种属荧光素标记的二抗（常用iF488标记的二抗或CY3标记的二抗）：将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后平放于透明湿盒在圈内滴加与一抗相应种属的荧光素标记的二抗覆盖组织，室温孵育50min。
6、DAPI复染细胞核：切片稍甩干后将切片平放于避光湿盒在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
7、自发荧光淬灭：切片稍甩干后将切片平放于避光湿盒在圈内加入自发荧光淬灭剂5min，流水冲洗10min。
8、封片：将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
9、镜检成像：切片置于玻片数字扫描仪下扫描全景成像。各种荧光素颜色及激发与发射波长见下表。
TSA法实验具体流程：
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将石蜡切片放入环保型脱蜡液I 10min-环保型脱蜡液II 10min-环保型脱蜡液III 10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-无水乙醇Ⅲ 5min-蒸馏水洗。
2、抗原修复：组织切片置于盛满抗原修复缓冲液（PH 6.0 柠檬酸； PH 9.0 EDTA；PH 8.0 EDTA）的抗原修复盒中于微波炉内进行抗原修复。维持缓冲液沸腾10min左右，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min(修复液种类和修复条件根据组织来确定）。
3、画圈, 双氧水封闭：切片稍甩干后用免疫组化笔在组织周围画圈（防止试剂流走），切片平放于避光湿盒滴加3%双氧水溶液，室温避光孵育25 min左右，封闭内源性过氧化物酶。将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、血清封闭:切片平放于透明湿盒滴加血清室温封闭30min。一抗是山羊来源用10%兔血清封闭，一抗其它来源的用3%BSA封闭。
5、加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加用无菌PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于透明湿盒内4°C孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。
6、加对应种属HRP标记二抗：将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后平放于透明湿盒在圈内滴加与一抗相应种属的HRP标记的二抗覆盖组织，室温孵育50min。
7、加TSA（常用iF488-TSA或iF555-TSA）：将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后将切片平放于避光湿盒在圈内滴加iF555-TSA，避光室温孵育10min。 孵育完后，将玻片置于TBST中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
8、DAPI复染细胞核：切片稍甩干后将切片平放于避光湿盒在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
9、自发荧光淬灭：切片稍甩干后将切片平放于避光湿盒在圈内加入自发荧光淬灭剂5min，流水冲洗10min。
10、封片：将玻片置于PH7.4 PBS中在钟摆摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
11、镜检成像：切片置于玻片数字扫描仪下扫描全景成像。
