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BC5400-50T/24S 抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒 酯酶
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- BC5400-50T/24S
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北京索莱宝科技有限公司
（Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. ）是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。
总部位于北京，并在设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的。
公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，索莱宝公司提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，索莱宝谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
索莱宝公司坚持与接轨，注重和企业的合作与交流，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作，不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。
索莱宝诚招生物试剂研发人员，期待与广大同行精诚合作，为广大科研工作者提供优质的产品，高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助，您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行，共同创造美好的明天。
详细信息
抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
货号：BC5400
规格：50T/24S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体8mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
试剂四 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂五 | 液体0.5mL×1支 | 2-8℃保存 |
试剂六 | 液体3.5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂七 | 液体3.5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂八 | 液体40mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前加入3.5mL试剂一，充分溶解。如果试剂溶解不充分，可将试剂加热至50℃促进其溶解。未用完的试剂2-8℃保存可以保存8周。
2、 试剂三：临用前加入3.5mL蒸馏水，充分溶解，未用完的试剂-20℃保存可以保存4周，避免反复冻融。
3、 试剂四：临用前加入5.5mL蒸馏水溶解，未用完的试剂2-8℃保存可以保存4周。
4、 试剂五：临用前根据样本数量按照试剂五：蒸馏水=1:9的比例配制，现用现配。
5、 标准品：5μmol/mL 酚标准液。临用前取100μL的5μmol/mL 酚标准液于EP管中，加入700μL蒸馏水充分混合，配制成0.625 μmol/mL的酚标准溶液。
产品说明：
抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）是破骨细胞的特征性酶，TRAP参与骨基质中固体钙磷矿化底物的降解，其表达和分泌与破骨细胞功能密切相关。
在酒石酸存在的情况下，抗酒石酸酸性磷酸酶的活性不被抑制，而其他的酸性磷酸酶的活性则会受到抑制。酸性条件下，抗酒石酸酸性磷酸酶催化PNP P生成对硝 基苯*。对硝 **酚在碱性条件下呈黄色，可以在400nm波长下检测吸光度。产物黄色越深，说明抗酒石酸酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/超声破碎仪、蒸馏水和冰。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、液体：直接测定。(若溶液呈现浑浊，则离心取上清后再测定)。
二、测定步骤
1、 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。
2、操作表：（在EP管中加入下列试剂）
试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 标准空白管 |
样本 | 50 | 50 | - | - |
标准品 | - | - | 50 | - |
蒸馏水 | - | 50 | - | 50 |
试剂一 | 50 | 50 | 50 | 50 |
试剂二 | 50 | 50 | 50 | 50 |
试剂三 | 50 | - | 50 | 50 |
试剂四 | 50 | 50 | 50 | 50 |
试剂五 | 50 | 50 | 50 | 50 |
试剂六 | 50 | 50 | 50 | 50 |
试剂七 | 50 | 50 | 50 | 50 |
37℃避光反应1小时 | - | - | ||
试剂八 | 600 | 600 | 600 | 600 |
混匀后，测定在400nm处的吸光度，记作A测定，A对照，A标准，A标准空白。∆A测定=A测定-A对照，∆A标准=A标准-A标准空白。（标准管和标准空白管只需做1-2次。）
三、TRAP活性计算
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol酚定义为一个酶活力单位。
TRAP活性（U/mg prot）=(∆A测定×C标准÷∆A标准) ×V样÷（Cpr×V样）÷T×103×F=10.42×∆A测定÷∆A标准÷Cpr×F
(2) 按样本质量计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol酚定义为一个酶活力单位。
TRAP活性（U/g 质量）= (∆A测定×C标准÷∆A标准) ×V样÷（W÷V样总×V样）÷T×103×F=10.42×∆A测定÷∆A标准÷W×F
(3) 按细菌或细胞数目计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol酚定义为一个酶活力单位。
TRAP活性（U/104 cell）= (∆A测定×C标准÷∆A标准) ×V样÷（N÷V样总×V样）÷T×103×F=10.42×∆A测定÷∆A标准÷N×F
(4) 按血清（浆）等液体体积计算
单位的定义：每mL血清（浆）等液体每分钟催化产生1nmol酚定义为一个酶活力单位。
TRAP活性（U/mL）= (∆A测定×C标准÷∆A标准) ×V样÷V样÷T×103×F=10.42×∆A测定÷∆A标准×F
C标准:酚标准液，0.625 μmol/mL ；V样：反应体系中加入的样本体积，0.05mL；V样总：加入的提取液体积，1mL；T：反应时间，60min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌数目，500万；103：单位换算系数，1μmol/mL=103nmol/mL；N：细胞或细菌数量，以万计；F：样本稀释倍数。
注意事项：
1、 如果测定的吸光值或∆A测定大于1.2，可以对样本用蒸馏水进行稀释或者缩短37℃酶促反应时间；∆A测定小于0.01，可以加大样本量或者延长37℃酶促反应时间。最终计算时同步修改计算公式。
实验实例：
1、 称取0.1006g兔子肝脏组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，将上清稀释2倍按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算∆A测定=A测定-A对照=0.824-0.038=0.786，∆A标准=A标准-A标准空白=0.653-0.033=0.620，带入公式计算：
TRAP活性（U/g 质量）=10.42×∆A测定÷∆A标准÷W×F=262.622 U/g 质量
2、 称取0.1000g竹子叶，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，将上清稀释8倍按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算∆A测定=A测定-A对照=0.656-0.045=0.611，∆A标准=A标准-A标准空白=0.653-0.033=0.620，带入公式计算：
TRAP活性（U/g 质量）=10.42×∆A测定÷∆A标准÷W×F=821.499 U/g 质量
3、 吸取0.05mL人血清，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算∆A测定=A测定-A对照=0.197-0.157=0.040，∆A标准=A标准-A标准空白=0.653-0.033=0.620，带入公式计算：
TRAP活性（U/mL）=10.42×∆A测定÷∆A标准×F=0.672 U/mL
参考文献：
[1] Megat R, Wahab A, Dasor M M, et al. Crevicular tartrate resistant acid phosphatase activity and rate of tooth movement under different continuous force applications[J]. African journal of pharmacy and pharmacology, 2011, 5(20):2213-2219.
[2] Natasˇa Mitic´, Mohsen Valizadeh, Eleanor W.W. Leung, et al. Human tartrate-resistant acid phosphatase becomes
an effective ATPase upon proteolytic activation [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics 439 (2005) 154–164.
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