产品描述

本产品是一款基于沉淀法的外泌体分离试剂盒，适用于多种样本的外泌体分离，具有操作简便、分离速度快和高回收率的优势。本试剂盒分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。本试剂盒兼容多种样本类型，适用于血清、血浆、细胞培养上清和尿液等。

订购信息

产品组分

运输与保存

常温运输。组分A在4℃保存，组分B在常温保存，有效期 12个月。

使用方法

自备仪器、试剂与耗材：高速冷冻离心机；离心管

1. 准备工作

(1) 取出在 4℃ 保存的外泌体浓缩剂，使其恢复至室温。

(2) 建议使用新鲜样本；如样本保存在-80℃，请于37℃水浴中解冻备用。

2. 样品预处理

(1) 去除细胞：对含细胞样品，4℃，300g，离心 5min，将上清转移至新离心管；无细胞样品可跳过此步骤。

(2) 去除细胞及细胞碎片：4℃，2,000g，离心10min，将上清转移至新离心管。

(3) 去除大体积颗粒：将步骤(2)获得的上清液在4℃，12,000g，离心15min，取上清转移至新离心管。或者：将步骤(2)的上清液通过 0.45 μm 微孔滤膜过滤，收集滤液。

3. 沉淀外泌体

(1) 将预处理后的样品 20 mL 加入 50mL 离心管，加入 5mL 外泌体浓缩剂，涡旋混匀1min（务必混匀）。若需调整体积，可按样本:外泌体浓缩剂= 4:1 的比例等比放大或缩小。

(2) 混匀后，4℃孵育 8 h以上；如时间允许，推荐在 4℃ 过夜孵育，但建议不超过24h。

(3) 将样品4℃，12,000g 离心 45 min。弃上清，吸弃或小心倒出上清后，使用 200 μL 移液器尽量轻轻吸净残余上清。

4. 回收外泌体

(1) 重悬外泌体：向沉淀中加入 200μL无菌PBS，用移液器轻柔上下吹打，充分混匀。建议每 20mL 细胞培养上清用 200μL 无菌 PBS 重悬。

(2) 收集外泌体颗粒：将重悬液转移至新的 1.5mL 离心管，在 4℃、12,000g 下离心 5min，保留上清，此上清液中富含外泌体颗粒。注：若沉淀较多，取离心后上清液，12,000g，5min，离心多次，直至无明显沉淀，该上清液即为外泌体。

5. 精纯外泌体

(1) 纯化外泌体：将收集的外泌体粗品转入外泌体纯化滤器（EPF）上室，4℃、3000×g 离心 10 min。离心后，收集 EPF 柱底的滤液，即为纯化后的外泌体颗粒。注：EPF不可重复使用，如 EPF发生堵塞，需将外泌体 12,000g 离心 30min，取上清，再用新的 EPF 纯化。

(2) 外泌体储存：分离的外泌体可立即用于后续实验；如需 24 h 内使用，可 4℃ 保存，长期保存请分装后置于 -80℃。

注意事项

1． 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2． 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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