人TNF-β检测试剂盒（ELISA）

ELISA操作孵育过程常见问题及解答：

1） 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗*；

2） 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗*。

3）孵育温度未按照说明书要求进行，温度过高或过低；
解决办法：
1） 贴封片或加盖；

2） 按说明步骤严格控制操作时间和孵育温度。

通用名称：人TNF-β检测试剂盒（ELISA法）
英文名称：RayBio® Human TNF-alphβ ELISA Kit
产品货号：TNF-b
产品规格：96T
检测样本：血清、血浆、细胞上清液
公司品牌：美国RayBio
储存条件：-20℃
检测方法：ELISA方法
预期用途：定量测定人血清血浆和细胞培养上清液中的TNF-β的含量
参考价格：询价
供应商家：深圳市科润达生物工程有限公司

人TNF-βELISA试剂盒预期用途
RayBio®人TNF-β细胞因子酶免试剂盒采用体外酶联免疫吸附测定法，定量测定人血清（正常血清和血浆中的人TNF-β浓度低，在该测定中可能无法检测到），血浆和细胞培养上清液中的TNF-β的含量。

人TNF-β检测试剂盒组成成分
●TNF-β酶标板（项目A）——12*8=96孔，包被有抗人TNF-β抗体——4℃ 1个月
●浓缩洗涤液（20x）（项目B）——20x浓缩溶液 25ml——4℃ 1个月
●标准蛋白（项目C）——2瓶人类TNF-β。1个小瓶就够配制每个一式两份的标准品。—— -80℃1个月
●检测抗体TNF-β（项目F）——2瓶生物素化的抗人TNF-α。
●每个小瓶足以测定微板的一半。——4℃ 5天
●浓缩HRP-链霉亲和素（项目G）——200μl 700X浓缩HRP缀合链霉亲和素——不能保存和重新使用
●一步法TMB底物（项目H）——TMB溶液12ml——N/A
●终止液（项目I）——8ml 0.2M硫酸——N/A
●测定稀释剂A（项目D）——30ml稀释缓冲液，0.09％叠氮化呐防腐剂。——N/A
●测定稀释剂B（项目E）——15ml 5X浓缩液——4℃ 1个月
●将未使用的板条重新装回到含有干燥剂包的袋中，沿着整个边缘重新密封。

人TNF-β检测试剂盒检测原理
人TNF-β细胞因子酶免试剂盒使用包被有人TNF-β特异性抗体的96孔酶标板，标准品和样品被加入到孔中，样品中存在的TNF-β通过固相的抗体与孔结合。洗涤后加入生物素化的抗人TNF-β抗体。 洗去未结合的生物素化抗体后，将HRP-标记的链霉素加入到到孔中。 再次洗涤板孔，向孔中加入TMB底物溶液，底物显色与所结合的TNF-β量成比例。 加入终止液颜色从蓝色变为黄色，并且在450nm处测量颜色的吸光度值。

人TNF-β检测试剂盒存储
人TNF-β检测试剂盒可在-20°C下保存，从装运之日起存放可长达1年。 避免反复冻融循环。 试剂盒可以在4℃下储存长达6个月。 对于更长时间储存时，建议储存在-80°C。

人TNF-β检测所需材料（试剂盒内不提供）
●能够测量450 nm处吸光度的酶标仪。
●提供2μl至1 ml体积的精密移液管。
●可调1-25毫升移液器用于试剂制备。
●100毫升和1升刻度量筒。
●吸水纸。
●蒸馏水或去离子水。
●双对数做图纸或计算机和软件进行ELISA数据分析。
●准备标准品或样品稀释液的管子。

人TNF-β检测试剂盒检测步骤
●使用前将所有试剂和样品置于室温（18 - 25ºC）。建议所有标准和样品至少重复一次。
●根据您的实验标记可拆卸的8孔条。
●分别加入样品和每个标准品100μl（参见试剂制备步骤3）到适当的板孔中。盖上盖子，室温温和振荡孵育2.5小时
●弃去溶液，用1X洗涤液洗涤4次。使用多通道移液器或自动洗板机洗板，每孔加入洗涤缓冲液（300μl）。每个步骤中去除液体对于良好的性能是至关重要的。洗完后，通过吸取或倾析清除任何剩余的洗涤缓冲液。倒置板并用干净的吸水纸吸干印迹。
●每孔加入100μl1X制备的生物素化抗体（试剂制备步骤6）。在室温下温和振荡孵育1小时。
●弃去溶液。重复洗涤，如步骤4。
●加入100μl制备的链霉亲和素溶液（见试剂制备步骤7）。在室温下温和摇动孵育45分钟。
●弃去溶液。 重复洗涤，如步骤4。
●向每个孔中加入100μlTMB一步底物试剂（项目H）。在室温下在黑暗中轻轻振荡孵育30分钟。
●向每个孔中加入50μl终止液（项目I）。 立即读取450 nm处吸光度值。

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