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新西兰TCB胎牛血清进口报关怎么操作？

　　大量进口新西兰TCB胎牛血清要交关税吗？

　　进口新西兰TCB胎牛血清有哪些税种？税率多少？

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　　个人如何量进口新西兰TCB胎牛血清？

　　进口新西兰TCB胎牛血清没有3C和原产地证怎么办？

　　在中国销售新西兰TCB胎牛血清需要新西兰TCB胎牛血清公司授权吗？

　　鉴于进口胎牛血清货源紧张，价值昂贵，因此胎牛血清进口清关的安全可靠性就显得尤为重要。挑选进口胎牛血清清关商时一定要擦亮眼睛，寻找专业的清关商。因为胎牛血清从香港进口是一条极为便利的渠道，因此很多中港物流公司见有利可图就纷纷接单，但绝大多数公司的各种条件并不符合胎牛血清清关的苛刻要求。

　　新西兰TCB胎牛血清进口到中国三种方式：直邮、一般贸易进口、快件进口，进口新西兰TCB胎牛血清优势。

　　进口新西兰TCB胎牛血清上海青旗报关具有如下优势：

1，不需要任何资质，个人也可以大量进口新西兰TCB胎牛血清；

2，缺乏3C和单证也可以从新西兰操作进口TCB胎牛血清事宜；

3，包税清关，极大地节省了新西兰TCB胎牛血清进口的成本；

4，极速到货，新西兰TCB胎牛血清进口到中国全程只需要10天时间；

5，省心舒心，一站式服务，进口新西兰TCB胎牛血清就跟发国内物流一样简单。

　　一，特级胎牛血清进口

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Bioind特优级胎牛血清

　　二，优级胎牛血清进口

Hyclone加拿大优等胎牛血清

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Gibco澳大利亚胎牛血清

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　　三，普通级胎牛血清进口

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　　然而，为防止国外疾病入侵，保障我国生物学安全，我国对很多国家血源的胎牛血清执行禁止进口的政策。从而导致了进口血清*的局面，大家所熟知的GIBCO胎牛血清，货号为16000-044，其价格曾经涨到8000元的天价，还供不应求。因此如何想办法进口Gibco胎牛血清是很多贸易商面临的首大难题。

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　　为满足广大进口胎牛血清客户的需求，上海青旗生物打造了一条专业可靠的胎牛血清进口渠道。

TCB牛血清使用方法

在细胞培养过程中，经常加入5%-20%的胎牛血清，常使用的Bovogen胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果，我们在实验中使用10%的Bovogen澳洲胎牛血清培养293T细胞，效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的Bovogen FBS或者20%的Bovogen胎牛血清，要根据具体 细胞选择合适的Bovogen胎牛血清浓度。

TCB胎牛血清FBS保存方法

1、需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在 37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会被破坏，而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶,可 将40～45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前，必须预留一 定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接 过滤血清。

3、瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全 部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度 与成分均一,减少沈淀的发生。.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而 出现沉淀。

4、热灭活是指56℃, 30分钟加热已*解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体 成分灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体 参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞 发生化学趋化和活化。

5、血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身 的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物 的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑 点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。

TCB胎牛血清(Bovogen血清)使用中遇到的常见问题总结

一、TCB血清灭活问题。

1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？

答：不是必须的，看做什么实验了。

2、问：TCB胎牛血清灭活是56℃ 30分钟吗？

答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。 但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。

3、问：我要做滋养细胞培养，胎牛血清要灭活吗？

答：进口的一般都已灭活，国产的不一定，还是灭活一下再用较安全。

4、问：我用病毒上清转染细胞，培养用的血清需要灭活吗？因为血清中可能有些补体和抗体，是不是会影 响转染？我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合，影响转染，正确吗？细胞是单核细胞白血病细胞， 病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时，目的是什么？

答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主 结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活 ！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。

四、FBS可否代替人AB型血清？

问：我现在在做人的外周血b淋巴细胞的培养，文献上要求用人的AB型血清，但是我觉得很多代理商都没有 。我想FBS代替，但不知道可否，我先是担心免疫排斥之类，但是我查了些资料后，应该不会(我觉得)。但是我又不 能够TRY。因为细胞因子确实太贵了，所以咨询一下。谢谢！

答：你照文献的做。除非你系列实验证明你用代用品的结果与文献的相同(你还是要用到文献的试剂) 。细胞培养的影响因素很多，特别是培养基的成分。

五、血清的制备方法问题。

1、问：我的实验需要自己制备一些血清用于培养细胞，有没有人知道用于培养细胞的血清需要怎样的制备 过程？

答：自己制备血清当心污染啊。如果无菌条件好的话，用静置析出方法就行。

2、问：一般我们用得胎牛血清用前还要灭活，我想用大鼠的血，不知道要不要灭活？

答：你直接把采来的血液在离心管里4℃过夜，离心，取上清，在无菌过滤，也可灭活，然后分装冻存，用 时再配。

3、问：如果灭活会不会对血清中的一些因子有损伤？

答：加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺， 激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。灭活 一般不会对血清中的一些因子损伤的。

六、心肌细胞原代培养时血清的使用问题。

1、问：在进行心肌细胞原代培养时，需要用含血清的培养基中止胰酶的消化作用，我现在使用的是含血清 10%的培养液，但近日看北医一个细胞培养的课件发现，有用1%血清培养液进行中止消化的，想问一下，1%的是否可 以，效果是否有保证？这样确实能节省不少血清的。

答：关于心肌细胞元代培养的FBS问题：

(1)1%的血清*培养基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌细胞元代培养就不行。 10%的FBS* 培养基效果都不太好，开始心肌细胞元代培养需要高浓度的FBS，20%左右，但这就有出现另一个问题，在FBS*培 养基中，成纤维细胞呈优势细胞，须得在培养基加入适量的BrdU以抑制其生长，纯化心肌细胞。

(2)FBS的作用不仅仅是拿来中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白质如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 。

(3)元代心肌细胞培养的FBS使用，有讲究：刚开始使用20%左右的高浓度的FBS，后逐渐递减为无血清的 DMEM/F-12培养基培养。

2、问：我胰酶的用量是0.08% ，并混和了0.08%的胶原酶。FBS要高浓度递减是否是说的在细胞培养中啊， 难道在消化时终止也需要如此高的浓度吗，还有，我的BRDU只用到48小时就不用了，因为担心其损伤太大，可以持续 用多久呢？

答：我用10%FBS终止的，然后差速1h，然后还是用10%FBS的HG-dmem养的，没有用brdu，心肌细胞还是比 较多和稳定的，我第3天就可以用，第2天晚上看就会有搏动。