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免疫组化实验
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南京信帆生物技术有限公司,坐落于风景优美的南京，专注于生命科学和生物医学领域，集化学试剂、生物试剂、销售于一体的新型生物公司。为各大高校，科研单位、医院、制药与诊断试剂生物试剂厂家等客户提供多种生物学检测试剂盒，进口常规生化试剂、抗体、化学试剂、药典级试剂、标准品、血清等产品。覆盖分子生物学、生物化学，细胞生物学、免疫学、蛋白组学、生物制药与诊断试剂研发生物试剂等领域。
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详细信息
上海信帆生物科技有限公司具有专业的生物实验室，10年以上操作经验的技术人员，能够专业、高效的进行免疫组化实验操作。
实验技术简介：免疫组化是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组化（IHC）技术通过计分法或灰度计量法也可以反应抗原的表达量，但其特点在于切片制作过程中保持组织、细胞的原有结构及形态，因此可以反应目标抗原在组织结构中的分布以及亚细胞定位。组织细胞定位往往是生理功能发挥或变化的体现，是研究中常常关注的因素。
免疫组化主要步骤:
1.洗载玻片: 将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中,目的是为了是载玻片上的硅胶等除去,同时使一些肉眼看不见的凹凸不平的表面变平整,便于组织吸附,然后置于清水中清洗,除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4(大约冲一个小时左右),再将载玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从而产生吸附作用。
2.包埋组织: 先在铁模具中加入一些液态石蜡，先稍微冷却，然后再将待包埋的组织置于石蜡之中，并排列整齐，再将塑料模具盒盖上，后加入少许液体石蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。
3.切片：将包埋好的组织从模具上取下来，并置于石蜡切片机上，切片机通过调节上下左右来来使组织和切割方向*，然后调节切片的厚度，一般为5µm,如果比较难切，则可以适当调整厚度，用毛笔将切割的载玻片向外拉，并用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。
4.捞组织：当组织载玻片置于40°C温水中之前，要先将水浴中的气泡赶走，以免气泡受热上浮而贴到组织上，组织受热展开，醉好是组织不起皱纹，用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用的，每张载玻片上通常捞两份组织，做对照使用，这样形成的误差就比较小了，而且捞载玻片的时候醉好方向*，以便观察，再将捞出来的载玻片置于架子上，放入37°C温箱中烘干。
5.脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯,依据的是相似相溶的原理.一般在每个试剂中放10min,天气热可以少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min.
6.抗原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。
7.血清封闭：冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时。血清稀释10倍（900µlPBS：100µl血清封闭液）。
8.加一抗：将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜。
9.加二抗：将载玻片从冰箱中取出，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
10.加SABC: 将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。SABC稀释100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
11.加显色剂: 将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀） A：DAB B：H2O2 C：磷酸缓冲液
12.复染: 将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。
13.脱水：将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每个试剂中放置2min，后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。
14.封片：用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。
免疫组化的相关试剂：重要的是选择好一抗、二抗或者还有三抗，注意抗体的特异性、效价和交叉反应。
【应用范围】
1.病理诊断，如恶性肿瘤的诊断和分型；
2. 观察并比较组织内目的蛋白的分布情况；
3. 观察并分析不同组织间目的蛋白表达和分布的差异化；
4. 比较和分析目的蛋白在组织内的相对表达量；
5. 组织内目的蛋白的定性研究；
6. 组织形态观察等。
【实验保证】
- 完善的实验服务流程
- 的实验员全程手工操作；
- 鼎级期刊的图像水准；
- 真实客观的实验结果
- 一路相伴的技术咨询。
客户提供：
- 新鲜的组织块
- 固定的组织块
- 石蜡组织或切片等等
实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜，请联系上海信帆生物。
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