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8203-35 利什曼虫IgG检测试剂盒
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详细信息
中文名称：利什曼虫IgG检测试剂盒
英文名称：Leishmania IgG test kit
产品规格：96T
预期用途：
利什曼虫IgG检测试剂盒可用于定性筛选血清中的内脏利什曼原虫IgG抗体 。仅用于科研使用。
摘要介绍：
利什曼虫是一种影响了世界上数百万人口的普遍疾病。从范围来看，利什曼虫已经成为一种遍布各大洲严重的感染病，尤其是欧洲，印度，亚洲，非洲和中东地区。内脏利什曼病，又称为黑热病，是通过被感染的白蛉叮咬传播给人类的，这种白蛉寄生于杜氏利什曼虫复合体。当白蛉与接触感染对象（比如狗）接触后就成为利什曼虫的宿主了。由于内脏利什曼虫攻击肝脾等内脏系统以及免疫系统，通常利什曼虫已与AIDS感染密切相关。内脏利什曼原虫是一种高死亡率的严重疾病。
几种测试方法已用于诊断急性内脏利什曼病。例如，间接荧光免疫抗体测试（IFAT)和直接凝集实验（DAT）是实践中的两个血清学诊断方法，这是因为抗利什曼虫抗体的滴度在急性阶段通常很高。另一个不太成功的方法是骨髓穿刺。这种方法不仅痛苦和危险，而且成功率也不高。另外，ELISA方法是常用的血清学诊断方法，有时会与IFAT和DAT结合使用。
检测原理：
利什曼虫的IgG检测试剂盒原理是一个三步温育过程，即初次温育涉及利什曼虫抗原在ELISA板孔上的包被。在这一步中，任何与抗原反应的抗体都会结合到板孔中。然后，洗净板孔除去测试样品。随后加入酶标记物。在第二次温育时，酶标记物将与任何存在的抗体结合。在第三次温育前，需要充分洗涤板孔。然后加入显色剂四甲基联苯胺（TMB)。酶标记物催化过氧化氢的氧化反应，显色剂变为蓝色。加入终止液后蓝色会变为明亮的黄色。反应即终止。可用酶标分析仪读取实验结果。
组成成分：
名称 | 数量 | 成分 |
ELISA板 | 96T | 包被了利什曼虫抗原的微量滴定板 |
酶标记物 | 1×11ml/瓶 | 含硫柳泵稳定缓冲液的辣根过氧化物酶（HRP)。 |
阳性质控 | 1×1ml/瓶 | 含硫柳泵缓冲液的稀释利什曼虫阳性人血清。 |
阴性质控 | 1×1ml/瓶 | 含硫柳泵缓冲液的稀释利什曼虫阴性人血清。 |
TMB底物溶液 | 1×11ml/瓶 | TMB显色剂。 |
浓缩洗涤液20X | 1×25ml/瓶 | 浓缩缓冲液和表面活性剂。 |
稀释缓冲液 | 2×30ml/瓶 | 缓冲蛋白溶液。 |
终止液 | 1×11ml/瓶 | 浓度为1mol/L的磷酸。 |
试验需要但未提供的设备：
1. 移液管
2. 洗涤板条用的挤压瓶
3. 去离子水
4. 带有450nm和620-650nm波长滤光片的酶标分析仪（可选目测读取结果）
5. 血清稀释用试管
实验步骤：
1. 根据待测样品数量加上2个质控品决定所需的板条数，并将其放置在托架上。
2. 加入100µl的阴性质控至1号孔，100µl的阳性质控至2号孔，以及将100µl稀释过的样品（1：40）溶液加入到剩下的孔中。（已稀释）
3. 在室温（15-25℃）下温育10分钟。
4. 震荡甩出洗涤液，并用稀释过的洗涤缓冲液清洗三次。
5. 每孔加入2滴酶标物。
6. 室温下温育10分钟。
7. 震荡甩出洗涤液，并用洗涤缓冲液清洗三次。
8. 每孔加入2滴显色剂。
9. 在室温下温育5分钟。
10. 加入2滴终止液，轻敲ELISA板使孔内溶液混合。
11. 对空气读数调零后读取450nm处的OD值（参考波长620-650nm）
