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茁彩生物 WB(核蛋白)检测服务
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生产厂家上海茁彩生物科技有限公司,以为生命科学工作者提供*高水准的产品及技术服务为经营宗旨,有别于众多国内企业单纯代理贸易的简单运营模式,更加强调技术的掌握和优化。强调良好的售后服务和技术支持,努力打造中国。
上海茁彩生物科技有限公司,是一家专注于免疫检测类试剂的高科技生物公司,主营产品为主营产品为ELISA试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、蛋白、抗体和其他配套试剂。
上海茁彩生物科技有限公司,可以外包诸多染色实验,样本不仅含有基础的动物组织切片,还包括植物叶片、动物细胞、骨片、脑片、皮肤等特殊样本。染色种类多,染色方法全,石蜡染色,冰切染色均可操作。同时,我公司还可以承接整体实验项目,细胞实验项目,包括样本的造模,细胞的培养,已经后续细胞的增殖、细胞粘附、细胞划痕等实验.
上海茁彩生物科技有限公司,一直坚持质量的稳定是生存的根本,我们更注重高品质的服务,把每一个客户当做自己事业上的伙伴!
WB(核蛋白)检测服务实验收费标准:
项目编号 | 项目名称 | 计价单位 | 单价 |
ZC1103 | WB(核蛋白、线粒体蛋白、膜蛋白) | 个 | 180元 |
实验结果展示:
蛋白样品制备的注意事项:
1、细胞数量达5×106
2、将细胞裂解液再离心,收集上清液,加loading煮样5min。
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项:
1、做胶:防止漏胶、进气泡以及花胶(水封、插梳子和拔梳子)
2、加样:两边加loading,加样量一样,加样时间要尽量短,以免样品扩散。
3、电泳:将胶夹好放于电泳槽中,加电泳buffer(内外面不能联通),将电压调到90V开始电泳。
转膜注意事项:
1、泡膜:转膜之前将海绵、胶、膜都用预冷的转移buffer浸泡20min。(1.凝胶若是没在预冷的转膜buffer中浸泡,就会在转膜过程中出现凝胶皱缩,导致出现转移条带变形。2.PVDF膜具有疏水性,需用甲醇浸泡)
2、转膜顺序:阴极碳板+海绵+三滤+胶+膜+三滤+海绵+阳极碳板
3、转膜条件:0.35A 250V 1h40min 冰浴中进行转膜(具体转膜时间要根据目的蛋白的大小而定;目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,反之则短)
4、避免直接用手碰杂交膜,使用镊子。因为手上的蛋白和油脂会影响转膜效率并会使膜脏掉。
5、夹好膜和凝胶后,确定在凝胶/膜和滤纸之间没有气泡存在,否则会导致转膜不*。
6、保证膜和滤纸的大小和凝胶*一样,过大和过小都会影响转膜效率。
7、鸡来源的抗体与PVDF和尼龙膜有较强的结合能力,从而产生较高的背景,故如果选择鸡来源的抗体最好使用硝酸纤维素膜(NC膜)
关于磷酸化蛋白检测的注意事项:
1、保持待测蛋白处于磷酸化状态!在标本提取液中加入足够的磷酸酶抑制剂(NaF,可以防止去磷酸化),并将标本时刻保持在冰浴中!
2、使用5%的BSA作为封闭试剂!不能使用脱脂奶粉!(因为脱脂奶粉中含有酪蛋白,会出现很高的背景)。
抗体保存注意事项:
1、收到抗体后按要求离心后再打开管盖进行分装盒保存!
2、对于大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃
①分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10μl每份。因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。
② 复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4℃,避免再冻起来!
③绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
3、大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。