起订量:
茁彩生物 免疫荧光(双标)服务
中级会员第6年
生产厂家上海茁彩生物科技有限公司,以为生命科学工作者提供*高水准的产品及技术服务为经营宗旨,有别于众多国内企业单纯代理贸易的简单运营模式,更加强调技术的掌握和优化。强调良好的售后服务和技术支持,努力打造中国。
上海茁彩生物科技有限公司,是一家专注于免疫检测类试剂的高科技生物公司,主营产品为主营产品为ELISA试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、蛋白、抗体和其他配套试剂。
上海茁彩生物科技有限公司,可以外包诸多染色实验,样本不仅含有基础的动物组织切片,还包括植物叶片、动物细胞、骨片、脑片、皮肤等特殊样本。染色种类多,染色方法全,石蜡染色,冰切染色均可操作。同时,我公司还可以承接整体实验项目,细胞实验项目,包括样本的造模,细胞的培养,已经后续细胞的增殖、细胞粘附、细胞划痕等实验.
上海茁彩生物科技有限公司,一直坚持质量的稳定是生存的根本,我们更注重高品质的服务,把每一个客户当做自己事业上的伙伴!
实验收费标准:
项目编号 | 项目名称 | 计价单位 | 单价 |
ZC1071 | 免疫荧光(双标) | 张 | 80元 |
免疫荧光(双标)服务实验结果展示:
1、 冰冻切片固定:冰冻切片从冰箱拿出来复温,晾干水分,冷丙酮固定10min,待丙酮*干后于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
2、 修复:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走),在圈内滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K储存液用PBS 1:9稀释)覆盖组织,37度温箱孵育30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
3、 破膜:切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织,常温下孵育20min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
4、 加试剂1,2:按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂1 (TdT) 和试剂2(dUTP)按2:29混合(试剂1,2为现配现用),加到圈内覆盖组织,切片平放于湿盒内,37℃恒温孵育2小时,湿盒内加少量水保持湿度。
5、 BSA封闭:将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min,在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织,室温封闭30min。
6、 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
7、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织,避光室温孵育50min。
8、 DAPI复染细胞核:切片用PBS(PH7.4)洗涤3次,每次5min。去除PBS后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。
9、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
10、 镜检拍照:切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm;FITC绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm;CY3红光激发波长510-560,发射波长590nm)
石蜡切片荧光tunel+免疫荧光双标实验步骤
1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15-20min-二甲苯Ⅱ15-20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗(冬天脱蜡时间稍微延长)。
2、 修复:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走),在圈内滴加蛋白酶K工作液(蛋白酶K储存液用PBS 1:9稀释)覆盖组织,37度温箱孵育30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
3、 破膜:切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织,常温下孵育20min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
4、 加试剂1,2:按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂1 (TdT) 和试剂2(dUTP)按2:29混合,加到圈内覆盖组织,切片平放于湿盒内,37℃恒温箱孵育2小时,湿盒内加少量水保持湿度。
5、 BSA封闭:将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min,在圈内滴加用3%BSA均匀覆盖组织,室温封闭30min。
6、 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
7、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织,避光室温孵育50min。
8、 DAPI复染细胞核:切片用PBS(PH7.4)洗涤3次,每次5min。去除PBS后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。
9、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
10、 镜检拍照:切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm;FITC绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm;CY3红光激发波长510-560,发射波长590nm)