登革热检测试剂操作说明书

目前市场上同一产品不同品牌的数量众多，怎么识别好的产品和不好的产品呢？以及操作步骤的重要性，即使是一个好的产品，样本处理不好也可能导致不好的结果，所以产品质量、操作细节和样本处理也决定了实验的成果。

科润达生物提供的是进口的登革热试剂，以及包装配送了完整的登革热检测试剂操作说明书，并且提供体贴的售后服务，上班期间有专业的指导技术人员解答问题，产品质量优质保障，欢迎咨询订购。

下面介绍的是有关于德国IBL品牌采用ELISA方法检测人血清和血浆中IgG抗体的登革热试剂，如有需要了解其他方法或者类型的登革热试剂，可以搜索科润达生物网站或者在平台留言联系我们获取资料。

登革热IgG检测试剂操作说明书

登革热IgG检测试剂盒预期用途
登革热IgG检测试剂盒可用于人血清、血浆中抗登革热病毒IgG抗体的定性检测。

登革热IgG检测试剂盒检测原理

抗登革热病毒IgG抗体的定性酶免检测利用的ELISA技术。微孔板上预先包被了结合样品相关抗体的登革热病毒2型抗原。洗板除去未结合的样品物质后，加入辣根过氧酶标记的抗人IgG酶联物。这一酶联物可与捕获到的登革热病毒特异性抗体结合。

加入能产生蓝色反应产物的TMB底物液后，如果显示蓝色则可知已形成免疫复合物。所显示颜色的强度与样品中登革热病毒特异性IgG抗体的量成正比。加入硫酸以终止反应,以便产生黄色的终点颜色。用一酶标仪在450m处读取OD值。

登革热IgG检测试剂盒组成成分
1、微孔板：12×8可拆板条，包被有登革热2型抗原，真空密封于铝铂金属袋中。
2、样品稀释液：1瓶，内含100ml样品稀释用缓冲液，pH2±0.2，液体为黄色，待用，白盖。
3、终止液：1瓶，内含15ml硫酸，0.2mol/l；待用，红盖
4、洗涤液（20×浓缩）：1瓶，50ml，含20倍浓缩的样品洗涤液，pH7.2±0.2，白盖
5、酶联物：1瓶，含20ml HRP标记的兔抗人IgG，蓝色，待用，黑盖。
6、底物液：1瓶，含15ml TMB，待用，黄盖。
7、登革热 IgG阳性质控：1瓶，2ml；黄色，待用，红盖
8、登革热 IgG临界质控：1瓶，3ml；黄色，待用，绿盖
9、登革热 IgG阴性质控：1瓶，2ml；黄色，待用，蓝盖

实验所需材料（未提供）
1）可在450/620nm处读数的酶标仪
2）37℃恒温箱
3）自动或半自动洗板机
4）取样吸头（10µl和100µl）
5）旋涡混合器
6）去离子水或双蒸水
7）试管
8）计时器

登革热IgG检测样本要求
■样本采集后（保存在2-8℃）应该在5小时内用于检测，否则应该保存在-20~-70℃。避免反复冻融，不推荐使用灭活的样本。
■样品稀释：样品使用样品稀释液以1:101的比例进行稀释。

登革热IgG检测方法
实验开始之前仔细阅读操作步骤，严格遵守操作步骤才可以获得可靠的实验结果。如果这实验是在ELISA自动系统上进行，为了避免洗板的影响，我建议在洗板步骤时，洗板3次改成洗板5次，洗涤液从300µl增加到350µl。实验开始之前，应当在试剂盒提供的结果单上标记好所有的样品和质控品。取适当数量的板条置于板架上。

请至少做以下几个孔：
1孔（例A1）做空白对照孔
1孔（例B1）做阴性质控
2孔（例C1+ D1）做临界质控
1孔（例E1）做阳性质控

我们建议您将质控和病人样品做双份检测。照说明书给出的实验步骤进行操作，并避免不同步骤之间的时间隔无明显差别。加每一质控品和样品时都应当用新的取样吸头。把恒温箱调至37 ± 1℃。

1）控品和已稀释好的样品分别100µl加入到相应的微孔中，留下A1做空白对照孔。
2）盖板。
3）37±1℃下温育1h±5min

4）温育后，移去粘性金属板，弃取孔内反应液，用300µl洗涤液洗板3次。避免反应孔中的液体溅出。每次洗板间的浸润时间都应大于5秒。后在吸水纸上拍干。

注意：洗板步骤很重要，洗板不充分将可能导致结果不精确或错误的OD值。
5）除空白孔外，在每一微孔中都加入100µl登革热抗IgG酶标物，盖板。
6）室温下温育30，避免太阳直射
7）重复步骤4
8）在每一微孔中加入100µlTMB底物液
9）室温下（20-25℃）避光温育15min
10）按加TMB底物液的顺序和速度在每一微孔中加入100µl终止液。温育之后，包被板内试剂的颜色由蓝色变为黄色。

注意：高阳性的病人样品会引起染色剂沉淀。这些沉淀物会影响OD值的读取。例如：我们建议按1：1的比例用生理盐水预先稀释样品。然后按1：100的比例用稀释液稀释样品，并将结果乘以2。

11）加终止液后30min之内在450/620nm处读取OD值。


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