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小鼠海马神经元细胞的培养及复苏操作步骤!
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小鼠海马神经元细胞的培养及复苏操作步骤!
小鼠海马神经元细胞的培养及复苏操作步骤!
一、基本信息
平台编号:bio-089797
规格: 1*10E6
拉丁属名:Mouse Hippocampal Neurons
中文名:HT22小鼠海马神经元细胞
细胞用途:仅供科研使用
二、细胞特性
1) 来源:小鼠,海马神经元
2) 形态:贴壁生长
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
三、运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
(3)收到细胞后请拍照,3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
四、细胞接受后的处理
1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml新的*培养基。
4)如果细胞长满(80%-90%)请及时进行细胞传代。
5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
五、细胞培养操作规程
1.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
六、HT22小鼠海马神经元细胞冻存步骤:我们实验室是按1:3:6 配冻存液1份甘油3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基):
⑴ 吸出旧培养液加PBS冲洗一次
⑵ 消化
⑶ 加培养基中止消化,有的细胞是加血清中止
⑷ 离心收集细胞,不同细胞离心率不一样(以上仅为贴壁细胞,悬浮细胞收集就用第四部)
⑸ 吸出离心管上清液,加1ML 的冻存液重悬细胞,移到冻存管,放4度半小时,-20度两小时,-70度过夜,再放液氮*保存。
七、HT22小鼠海马神经元细胞复苏操作步骤如下:
1.将培养基置于37℃回温,回温后将其用75%酒精擦拭,移入无菌操作台内;
2.戴上护目镜,厚毛线手套之后,从液氮罐中取出细胞冷冻管。若冻存管内有液氮进入,需拧松冻存管,排出内部残留的液氮,之后拧紧冻存管,放入37-40℃水浴中,并不时摇动,使其迅速融化,以足量75%酒精擦拭之,转移到已加入10ml培养液的离心管内;
3.在1,000 rpm下离心5~10分钟,弃去上清液,加入适量培养液后接种于培养瓶中,置 5% CO2温箱静置培养;
4.次日更换一次培养液,继续培养,观察生长情况。若细胞密度较高,及时传代;否则,及时更换培养基继续培养。
八、HT22小鼠海马神经元细胞复苏注意事项如下:
A.复苏细胞请一定要注意安全,尤其是来自客户的细胞。在放入液氮容器之前就应该检查冻存管是否拧紧。取出复苏时若有液氮进入,请一定要拧松冻存管,排出液氮,防止温度升高时爆炸。
B.细胞复苏时需使用培养液。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同的血清种类,若因实验需要,必须有所不同,须以缓慢比例渐次改变培养基组成,确定细胞适应后,方进行实验。
C.细胞复苏时可以暂时不使用抗生素(G418等),以利于细胞的恢复。
D.细胞复苏前需检查恒温水浴锅的温度是否已经适宜。
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