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线粒体膜电位
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代理商伊莱博生物科技(上海)有限公司,公司总部位于上海长江软件园。2024年1月与上海大学医学院成立联合研究中心,主要以生命科学研究为基础,专注于研究成果转化及技术服务创新,建立了包含肿瘤生物学、病理学、免疫学、细胞生物学、生物化学与分子生物学以及动物实验等学科的研究服务体系,为医学领域的发展做出了重要贡献。
目前已建成并投入使用的实验室面积近2800平方米,包含基础实验平台、组学实验平台以及动物实验平台,基本能够满足科研课题研究的全流程。
伊莱博生物拥有专业的技术支持和实验操作人员团队,核心成员来自中科院、复旦、交大、同济等国内重点高校及科研机构,能够提供前沿的、完善的实验技术咨询与服务。
为了响应国家大力发展基础研究的号召,推动实验科学领域的进步,伊莱博生物充分利用积累多年的科研资源优势,为广大科研工作者提供实验技术培训服务,从理论和实操两个部分,培养其科研思维以及解决问题的能力,为今后的科研工作奠定坚实的基础。
一、服务介绍
大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关,其中线粒体跨膜电位(MMP)的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。
二、实验原理
JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料,可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在,分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1浓度低或膜电位水平低时,主要以单体形式存在,激发波长为527nm,呈绿色荧光;当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时,形成聚合物,发出红色的荧光,激发波长为590nm。当细胞发生凋亡时,线粒体跨膜电位被去极化,JC-1从线粒体内释放,红光强度减弱,以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光,根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。
三、实验流程
1.细胞培养;
2.用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性依照组合阳性对照组,收集细胞;
3.用PBS洗涤细胞三次,收集不多于1×106的细胞;
4.取100μL10×IncubationBuffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×IncubationBuffer,混匀并预热至37℃;
5.吸取500μL1×IncubationBuffer,加入1μLJC-1,涡旋混匀配成JC-1工作液;
6.取500μLJC-1工作液将细胞均匀悬浮,37℃,5%CO2的培养箱中孵育15~20min。
7.室温离心(2000rpm,5min)收集细胞,用1×IncubationBuffer洗两次;
8.吸取500μL10×IncubationBuffer重新悬浮细胞;
9.流式细胞仪检测,分析。
四、客户提供
细胞株(冻存株或培养好的细胞),相关药品或MMP检测试剂盒(可代购)!
五、公司提供
实验步骤、结果图、数据结果和分析报告
实验周期:1-2周,具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。