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凋亡因子Caspase-389检测实验
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生产厂家公司承接各种实验代做外包服务:石蜡包埋、免疫组化、HE染色、PAS染色、DNA提取、RNA提取、探针、SNP检测、WB、EMSA、CCK8检测、细胞凋亡、细胞周期检测、流式、质粒转染、ROS活性氧检测、线粒体膜电位检测、平板克隆、软琼脂克隆、细胞划痕、细胞粘附,并为广大科研用户提供各种高品质的高*_端化学试剂、生物学试剂、免疫学检测,ELISA试剂盒(免费代测)、生化试剂盒、分析标准品、对照品、标准物质、食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品、兽药残留检测试剂、细胞培养服务等,应用覆盖药物分析领域、食品安全领域、聚合物研究领域、环境监测领域,客户广泛分布于食品、制药、第三方检测、环境测试机构、化工、科研院校、生物工程等行业。
主营:
1生化试剂、标准品对照品、标准物质、
2.ELISA试剂盒、分离液、分离液试剂盒
3.细胞:*细胞、国产肿瘤细胞、国产正常细胞、肿瘤耐药细胞
4.食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品、兽药残留检测试剂
5.耗材:常用实验耗材、移液器
凋亡因子Caspase-389检测实验
Caspase3
Caspase是- -个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase3也称CPP32, 是细胞凋亡过程中的一个关键酶,可以剪切procaspase2.6. 7和9,并可以直接特异性剪切许多caspase底物,包括PARP (poly(ADP-ribose) polymerase), ICAD (Inhibitor of caspase-activated Deoxyri- bonuclease), gelsolin和fodrin等。 这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用,包括染色质固
缩,DNA的**片段化等。同时caspase 3对细胞起泡(Cell blebbing)也起到关键作用。
检测原理基于casepase 3可以催化底物AC-DEVD-pNA产生黄色的pNA(-itroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测caspase 3的活性。pNA在405nm附近有强吸收。参照黄色产物pNA制作的标准曲线,可以作为定量caspase 3酶活性的标准品。
Caspase-8
Caspase 8通常以酶原的形式存在,在细胞凋亡的信号转导过程中被激活,Caspase 8被认为是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase,在Fas-receptor和TNFR-1介导的细胞凋亡 过程中caspase 8被激活,形成一个由p18和p10组成的二聚体,进一步激活下游的caspase 4, caspase 6。caspase 9和caspase 10。本方法基于Caspase 8可以催化底物AC-IETD-pNA产生黄色的pNA (-nitraniline),从而可以通过测定吸光度来检测Caspase 8的活性。pNA在405nm附近有强吸收。 检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线,可以计算样品的Caspase 8酶活性。
Caspase-9
Caspase 9也称ICE-LAP6或Mch6,是细胞凋亡信号转导过程中上游的caspase。线粒体释放细胞色素c以后,caspase 9可以和细胞色素c以及Apaf1形成复合物,同时被激活。激活的caspase 9可以激活细胞凋的关键酶caspase 3,从而促进后续的细胞凋亡信号。Caspase 9的激活可以通过磷酸化进行调控。
本方法基于Caspase 9可以催化底物Ac- LEHD -pNA产“生黄色的pNA (p-nitroaniline),从而可以通过测定吸光度来检测
Caspase 9的活性。pNA在405nm附近有强吸收。检测样本的405nm OD值参照pNA制作的标准曲线,可以计算样品的Caspase 9酶活性。
Caspase1
Caspase2
Caspase4
Caspase6
凋亡因子Caspase 3/8/9检测样本准备:
1)细胞样品:取1x107个细胞(约1个T25的培养瓶细胞量) , 600g 4°C离心5分钟收集细胞,小心吸除上清,PBS洗涤一次。吸取上清后,每管细胞样品加入100u|裂解液重悬沉淀,冰浴裂解15分钟。4°C 16,000g离心10-15分钟, 把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70°C保存样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度,尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml.
2)组织样品:约每10mg组织加入100ul裂解液,在冰浴上用玻璃匀浆器匀浆。然后把匀浆液转移到1 .5ml)离心管中,冰浴再裂解5分钟。4°C 16,000g离心10-15分钟,把上清转移到冰浴预冷的离心管中。立即测定caspase 3的酶活性或-70°C保存
样品。同时可以取少量样品用Bradford法测定蛋白浓度,尽量使蛋白浓度达到1-3mg/ml.
Caspase-3活性检测标准曲线
实验周期: 7-10个工作日内完成,重复检测优惠。
客户注意事项
1.抗体:事先咨询上海研谨生物,明确抗体种属以及是否有该抗体可使用。如无可由双方协商而定,客户自己购买提供或我公司代购;
2.标本收集与保存:
①组织样品:新鲜组织放入液氮或70度保存,组织不少于100mg (约绿豆大小) ;
②培养细胞:通过细胞计数取不少于000000个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-70°C,避免反复冻融) ;
③血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-70°C可长期保存,避免反复冻融)
④血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(以上4°C可保存15-20天,-70°C可长期保存,避免反复冻融)
3、样本运输:可选以下任何的一种方式寄送标本
①组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输;
②细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶(密封保证不污染,培养液不漏出,细胞不要长得太满,50%左右,灌满培养液) ;
③血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保证液体不漏出,视路途远近2-3天可到达)。
实验代做服务:
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