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2D-WB 蛋白双向 电泳实验服务

型号
2D-WB
参数
产地类别:国产 应用领域:医疗卫生,生物产业
上海研谨生物科技有限公司

中级会员13年 

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蛋白双向(2-D)电泳实验流程

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非标定量(Label-free)实验周期及交付标准

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各种实验代做:WB代做,免疫组化,PCR代做,细胞检测,食品安全检测试剂,兽药残留检测试剂,动物疫病类检测,销售高品质标准品,对照品,ELISA试剂盒,细胞,血清,等等

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4.食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品兽药残留检测试剂

5.耗材:常用实验耗材、移液器


详细信息


一、蛋白双向 电泳实验服务实验技术简介

2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程 为抗原蛋白混合物先经双向电泳分离,然后将凝胶蛋白转印至支持膜上,再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化,在蛋白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱鉴定技术,可以从蛋白混合物中找到免疫原性更强的抗原。

二、蛋白双向 电泳实验服务概述

2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程 为抗原蛋白混合物先经双向电泳分离,然后将凝胶蛋白转印至支持膜上,再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化,在蛋白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱鉴定技术,可以从蛋白混合物中找到免疫原性更强的抗原。

三、服务内容

1、蛋白质抽提与定量;

2、双向电泳;

3、转膜,封闭,孵育,显示成像。

四、实验操作流程

1、第--项电泳(IEF) ,胶条平衡,第二项电泳SDS-APGE.

2、第二项电泳结束后,取出凝胶进行转膜,转膜方法可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

3、封闭,5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时(室温)或过夜(4度)。

4、一抗孵育,根据抗体说明书选择孵育时间,常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜,一抗孵育后取出膜

TBST洗涤3次,每次5分钟。

5、二抗孵育:根据一抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。

6、显影:将A、B底物按比例稀释混台均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光时间需综台考虑蛋白质的上样量,抗体稀释浓度,抗体孵育时间等因素。

7、定影后,清洗胶片,晾干,标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。

送样须知,为了保证2D Western blot技术服务能顺利进行,样品寄送需满足以下要求:

1、顾客提供:组织、细胞、蛋白质溶液等; 一抗(可交由研谨公司代购)。

2、运输要求:干冰或液氮包装寄送。

注:样本应避免各类污染和反复冻融。

五、技术服务报告内容

1、蛋白质定量结果及电泳上样量;

2、原始胶片、电子图片及图片分析结果;

3、2D Western blot完整的实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。

附: 2D Western blot实验步骤

1、2D Western blot蛋白质样本制备,制备的主要原则是尽可能溶解全部蛋白质,破坏蛋白质与蛋白质间的相互作用,避免各类干扰物质,样品制备与IEF兼容等。

2、双向电泳的主要步骤,第-项电(IEF) ,胶条平衡,第二项电泳SDS-APGE.

3、第二项电泳结束后,取出凝胶进行转膜,转膜方法可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

4、封闭, 5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时(室温)或过夜(4度)。

5、-抗孵育,根据抗体说明书选择孵育时间,常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。

6、二抗孵育:根据-抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。

7、显影:将A、B底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光时间需综合考虑蛋白质的.上样量,抗体稀释浓度,抗体孵育时间等因素。

8、定影后,清洗胶片,晾干,标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。

2011年开始我们致力于在生命科学领域生物医学实验外包及论文润色服务,协助客户各类实验服务及论文润色十多年,是您值得信赖的科研合作伙伴!

如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究,欢迎您与我们联系。

 

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产地类别 国产
应用领域 医疗卫生,生物产业
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