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2D-WB 蛋白双向 电泳实验服务
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生产厂家公司承接各种实验代做外包服务:石蜡包埋、免疫组化、HE染色、PAS染色、DNA提取、RNA提取、探针、SNP检测、WB、EMSA、CCK8检测、细胞凋亡、细胞周期检测、流式、质粒转染、ROS活性氧检测、线粒体膜电位检测、平板克隆、软琼脂克隆、细胞划痕、细胞粘附,并为广大科研用户提供各种高品质的高*_端化学试剂、生物学试剂、免疫学检测,ELISA试剂盒(免费代测)、生化试剂盒、分析标准品、对照品、标准物质、食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品、兽药残留检测试剂、细胞培养服务等,应用覆盖药物分析领域、食品安全领域、聚合物研究领域、环境监测领域,客户广泛分布于食品、制药、第三方检测、环境测试机构、化工、科研院校、生物工程等行业。
主营:
1生化试剂、标准品对照品、标准物质、
2.ELISA试剂盒、分离液、分离液试剂盒
3.细胞:*细胞、国产肿瘤细胞、国产正常细胞、肿瘤耐药细胞
4.食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品、兽药残留检测试剂
5.耗材:常用实验耗材、移液器
一、蛋白双向 电泳实验服务实验技术简介
2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程 为抗原蛋白混合物先经双向电泳分离,然后将凝胶蛋白转印至支持膜上,再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化,在蛋白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱鉴定技术,可以从蛋白混合物中找到免疫原性更强的抗原。
二、蛋白双向 电泳实验服务概述
2D-WB是双向电泳与传统western blot结合而成的一项技术。一般实验流程 为抗原蛋白混合物先经双向电泳分离,然后将凝胶蛋白转印至支持膜上,再通过抗体杂交显色。2D-WB技术可以检测到抗原等电点或分子量发生的微小变化,在蛋白翻译后修饰的研究中有很好的应用;而2D-WB结合质谱鉴定技术,可以从蛋白混合物中找到免疫原性更强的抗原。
三、服务内容
1、蛋白质抽提与定量;
2、双向电泳;
3、转膜,封闭,孵育,显示成像。
四、实验操作流程
1、第--项电泳(IEF) ,胶条平衡,第二项电泳SDS-APGE.
2、第二项电泳结束后,取出凝胶进行转膜,转膜方法可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
3、封闭,5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时(室温)或过夜(4度)。
4、一抗孵育,根据抗体说明书选择孵育时间,常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜,一抗孵育后取出膜
TBST洗涤3次,每次5分钟。
5、二抗孵育:根据一抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。
6、显影:将A、B底物按比例稀释混台均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光时间需综台考虑蛋白质的上样量,抗体稀释浓度,抗体孵育时间等因素。
7、定影后,清洗胶片,晾干,标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。
送样须知,为了保证2D Western blot技术服务能顺利进行,样品寄送需满足以下要求:
1、顾客提供:组织、细胞、蛋白质溶液等; 一抗(可交由研谨公司代购)。
2、运输要求:干冰或液氮包装寄送。
注:样本应避免各类污染和反复冻融。
五、技术服务报告内容
1、蛋白质定量结果及电泳上样量;
2、原始胶片、电子图片及图片分析结果;
3、2D Western blot完整的实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。
附: 2D Western blot实验步骤
1、2D Western blot蛋白质样本制备,制备的主要原则是尽可能溶解全部蛋白质,破坏蛋白质与蛋白质间的相互作用,避免各类干扰物质,样品制备与IEF兼容等。
2、双向电泳的主要步骤,第-项电(IEF) ,胶条平衡,第二项电泳SDS-APGE.
3、第二项电泳结束后,取出凝胶进行转膜,转膜方法可选择湿法转移和半干法转移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。
4、封闭, 5%脱脂奶粉或5% BSA封闭1小时(室温)或过夜(4度)。
5、-抗孵育,根据抗体说明书选择孵育时间,常规的孵育条件是室温1小时或4度过夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。
6、二抗孵育:根据-抗选择合适的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室温孵育1小时后取出膜TBST洗涤3次,每次5分钟。
7、显影:将A、B底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上,暗室中将胶片置于膜上,盖上压片夹,曝光一定时间后将胶片放入显影液中进行显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光时间需综合考虑蛋白质的.上样量,抗体稀释浓度,抗体孵育时间等因素。
8、定影后,清洗胶片,晾干,标定marker,扫描图片和2D Western blot图片分析。
从2011年开始我们致力于在生命科学领域、生物医学实验外包及论文润色服务,协助客户各类实验服务及论文润色十多年,是您值得信赖的科研合作伙伴!
如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究,欢迎您与我们联系。
实验代做服务:
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