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72025 兔CD4分子（CD4）elisa试剂盒
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CD4和CD8是T淋巴细胞表面的糖蛋白,与淋巴细胞的抗原识别及其自身活化密切相关. CD4分子主要位于辅助性T淋巴细胞表面,参与细胞免疫并对体液免疫进行调控.CD8分子主要位于细胞毒性T淋巴性细胞表面,是细胞免疫的重要效应细胞,细胞表面的CD8分子主要有αα同源二聚体或αβ异质二聚体两种.本研究针对NCBI上公布的四川白鹅CD4(GenBank:JX902315)以及CD8α(GenBank: KC476104)分子序列设计引物合成胞外去信号肽区进行克隆,在PET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达,以IPTG诱导获得重组融合蛋白,Ni-NTA亲和层析获得纯化蛋白,并以此作为免... 展开 CD4和CD8是T淋巴细胞表面的糖蛋白,与淋巴细胞的抗原识别及其自身活化密切相关. CD4分子主要位于辅助性T淋巴细胞表面,参与细胞免疫并对体液免疫进行调控.CD8分子主要位于细胞毒性T淋巴性细胞表面,是细胞免疫的重要效应细胞,细胞表面的CD8分子主要有αα同源二聚体或αβ异质二聚体两种.本研究针对NCBI上公布的四川白鹅CD4(GenBank:JX902315)以及CD8α(GenBank: KC476104)分子序列设计引物合成胞外去信号肽区进行克隆,在PET-32a(+)/Rosetta(DE3)pLysS系统中进行原核表达,以IPTG诱导获得重组融合蛋白,Ni-NTA亲和层析获得纯化蛋白,并以此作为免疫原制备兔抗鹅CD4或CD8α以及鼠抗鹅CD4或CD8α胞外区的多克隆抗体.进一步利用纯化的抗体,分别建立了能够特异性检测鹅T细胞表面分子CD4或CD8α蛋白的细胞ELISA(Cell Marker ELISA)以及双抗体夹心ELISA(DAS-ELSIA)方法,通过检测机体内CD4以及CD8α蛋白,揭示体内T淋巴细胞的活化,分化情况,为监控鹅细胞免疫水平提供技术支持. 鹅CD4/CD8α胞外区的原核表达 鹅CD4基因的cDNA全长有1940个碱基,ORF为1443bp,编码480个氨基酸,本课题选取第85位到第1279位的编码398个氨基酸的胞外去信号肽区进行克隆表达.鹅CD8α基因的cDNA全长由1459个碱基构成,其中ORF为711bp,总共编码236个氨基酸,本文选取第99位到578位的编码160个氨基酸的胞外去信号肽区进行克隆表达. 针对四川白鹅CD4以及CD8α胞外区基因分别设计特异性引物进行扩增,并选取PET-32a(+)作为原核表达的表达载体.经过酶切连接,构建重组表达质粒goCD4-PET-32a和goCD8α-PET-32a,并转化到Rosetta(DE3) pLysS感受态细胞中进行诱导表达.对其表达产物进行
