起订量:
小鼠IgE ELISA试剂盒 Mouse Total IgE
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以色列Prospec, 专业从事细菌来源重组蛋白。一级代理
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美国Southernbiotech,专业提供效价好的二抗以及一些鸡和猪的流式抗体,一级代理。
美国Santa Cruz,专业提供效价好的二抗以及一些鸡和猪的流式抗体,一级代理。
小鼠总IgE抗体检测试剂盒
Mouse Total IgE (IgEa and IgEb) Detection ELISA Kit
Ca#3005
产品简介:
产品描述 | 定量检测小鼠IgE抗体 |
产品形式 | 96孔可拆板 |
检测原理 | 双夹心ELISA |
检测时间 | 4.5小时 |
检测范围 | 100 ng/ml to 1.6 ng/ml |
检测样本数 | 40(复孔) |
样本类型 | 血清&血浆 |
推荐样本稀释比 | 1:100或更大 |
显色液 | TMB(读取450nm) |
保存温度 | -20℃ 12个月 |
背景简介:
Ⅰ型超敏反应是一种典型的过敏性疾病,如哮喘、湿疹、花粉热、荨麻疹等。这种超敏反应是由IgE抗体介导的。IgE抗体与肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的高亲和力IgE受体(FcεRI)结合,并通过FcεRI(1)的稳定和积累显著上调FcεRI的表达,增强对过敏原的超敏反应。与细胞表面IgE抗体结合的特异性变应原交联FcεRI(2-3),引起肥大细胞的刺激和脱颗粒。这与多种促炎介质和细胞因子的释放有关,如组胺、蛋白水解酶、肝素和趋化因子,这些都会导致与I型超敏反应相关的症状。在过敏性疾病和寄生虫感染的疾病中,血清IgE抗体水平通常会升高。尽快血清IgE水平不能单独反应患者的过敏状态和临床症状,但是很明显血清IgE水平升高有助于诊断人类的这些疾病。
试剂盒组分:
组分 | 数量 | 规格 | 保存温度 |
IgE标准品(30051) | 1 | 100ng/瓶,冻干粉 | -20℃ |
捕获抗体(30052) | 1 | 0.1ml | -20℃ |
检测抗体(30053) | 1 | 冻干粉 | -20℃ |
溶液A-包被缓冲液(30054) | 1 | 10ml | -20℃ |
溶液B-样本、标准品缓冲液(30055) | 1 | 50ml | -20℃ |
溶液C-检测抗体缓冲液(30056) | 1 | 10ml | -20℃ |
溶液D-链亲和素-HRP缓冲液(9055) | 1 | 20ml | -20℃ |
链亲和素-HRP(9029) | 2 | 50ul/管 | -20℃ |
TMB 显色液(90023) | 2 | 0.2ml | -20℃ |
显色液稀释液(90022) | 1 | 10ml | -20℃ |
洗液,20X(9005) | 1 | 50ml | -20℃ |
ELISA 板 | 1 | 96孔(8x12) | -20℃ |
检测流程:
1)加入100ul 稀释后的捕获抗体到各孔。
2)4℃孵育过夜,洗板。
3)加入100ul稀释后的标准品和样本。
4)室温孵育2小时,洗板。
5)加入100ul稀释后的检测抗体。
6)室温孵育1小时,洗板。
7)加入100ul吸收后的链亲和素-HRP。
8)室温孵育1小时,洗板。
9)加入100ul TMB显色液
10)室温孵育25min
11)加入50ul终止液
12)读取450nm/630nm吸光度值
注意事项:
1)建议样本、标准品均做复孔检测
2)用前所有的缓冲液置于室温平衡
3)20X洗涤液低温可能会有结晶析出。如果有结晶析出,把洗涤液瓶置于温水中直至结晶*溶解。
4)用移液器准确定量提供的缓冲液,提供额外的缓冲液。
5)每个步骤结束后,用封板膜封板,防止蒸发。
6)如果只是用部分试剂,请参照操作步骤中的用量,做相应的使用量缓冲液配制。未使用的储液在原包装管内保存,置于-20℃保存。
7)正常小鼠总IgE水平大概在50-100ng/ml,氢氧化铝佐剂免疫2周后,抗体水平提高到ug/ml。随后用抗原免疫后增加至10-20ug/ml。
操作流程:
1. 加入包被抗体:用10ml包被抗体稀释液(Solution A)稀释1管包被抗体。或者根据用量按下表稀释。加入100ul稀释后的包被抗体液到各孔,4℃过夜孵育。剩余包被抗体储液-20℃冻存用于后续实验。
板条数 | 包被抗体 | 溶液A(ml) |
2 | 17 | 1.7 |
4 | 33 | 3.3 |
6 | 50 | 5.0 |
8 | 66 | 6.6 |
10 | 82 | 8.2 |
12 | 100 | 10.0 |
2. 制备标准品稀释液:推荐的标准品范围是1.6-100ng/ml。用样本/标准品稀释液(Solution)1ml稀释1管标准品(100ng/管),制备100ng/mlIgE标准品储液,随后用稀释液做系列稀释,制备:100ng/ml, 50 ng/ml, 25 ng/ml, 12.5 ng/ml, 6.3ng/ml, 3.1ng/ml, 1.6ng/ml。剩余的标准品储液(100ng/ml)可以-20℃保存,用于后续实验。建议您每次实验室,制备新鲜标准品。
3. 制备稀释样本:正常血清推荐稀释比是1:10-1:50。免疫过的小鼠血清稀释比从:1:100~1:1000,具体取决于免疫程序和血清样本收集时间。
4. 洗涤缓冲液稀释:用950ml双蒸水(1x洗液)稀释50ml 20x洗液。用1x稀释洗板至少三次。倒置微孔板,倒掉孔内液体,在吸水纸上拍干。不要让板干燥。
5. 加入标准品和样本:加入100ul标准品,SolutionB(空白)和样本到对应孔(做复孔。)室温孵育2小时。
6. 洗涤:用1x稀释洗板至少三次。倒置微孔板,倒掉孔内液体,在吸水纸上拍干。不要让板干燥。
7. 加入检测抗体:用10ml检测抗体稀释液(SolutionC)稀释1管检测抗体。或者用50ul SolutionC稀释1管检测抗体,按表格里需求量稀释。加入100ul抗体抗体稀释液到各孔,室温孵育1小时
板条数 | 检测抗体(ul) | 溶液C(ml) |
2 | 8 | 1.7 |
4 | 17 | 3.3 |
6 | 25 | 5.0 |
8 | 33 | 6.6 |
10 | 42 | 8.2 |
12 | 50 | 10.0 |
8. 洗涤:用1X稀释洗板至少三次。倒置微孔板,倒掉孔内液体,在吸水纸上拍干。不要让板干燥。
9. 加入链霉亲和素-HRP:用10ml链霉亲和素稀释液(Solution D)稀释1管链霉亲和素-HRP。加入100ul稀释后的链霉亲和素稀释液到各孔,室温孵育1小时。
板条数 | 检测抗体(ul) | 溶液C(ml) |
2 | 8 | 1.7 |
4 | 17 | 3.3 |
6 | 25 | 5.0 |
8 | 33 | 6.6 |
10 | 42 | 8.2 |
12 | 50 | 10.0 |
10.洗涤:用1X稀释洗板至少三次。倒置微孔板,倒掉孔内液体,在吸水纸上拍干。不要让板干燥。
11.加入TMB:用新管制备TMB。用10ml底物稀释液一管TMB。加入100ulTMB稀释液到各孔,室温孵育25min。
板条数 | TMB(ul) | 底物稀释液(ml) |
2 | 34 | 1.7 |
4 | 66 | 3.3 |
6 | 100 | 5.0 |
8 | 132 | 6.6 |
10 | 164 | 8.2 |
12 | 200 | 10.0 |
12.终止:加入50ul 2N硫酸(终止液)到各孔。
13.读板:读取450nm OD值。如果样本OD值大于标准品最高OD值,样本稀释后重新检测。630nm波长,检测的副波长。
结果计算:
1. 计算空白孔、样本和标准品OD值的平均值。
2. 用标准品和样本OD均值减去空白孔OD值。
3. 用标准OD值和标准品浓度值,绘制标准曲线。用Log/Log拟合曲线。见图例1.
4. 通过回归曲线计算样本中浓度值,通过乘稀释倍数得到样本的原始浓度值。