一、运输和保存

1、发送T25培养的细胞系方式：顺丰，灌满液发货

（1）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时。具体操作见细胞培养步骤。

（2）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

2、细胞系接收后的处理：

（1） 收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

（2） 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

（3） 弃去T25瓶中的培养基，添加6ml新的*培养基。

（4） 如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代。

（5） 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

二、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

（1） 准备基础培养基100%；北美胎牛血清5%，添加剂1%；双抗1%。

（2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

2、 细胞处理：

（1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

（2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行1:2传代培养（尽量用T25培养瓶）。

3、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

（1）选用原代细胞生长状态好（90－95％），生长数量大于5×105进行传代。

（2）吸除细胞培养液。用含双抗的1×PBS（pH7.4）清洗细胞培养瓶2次。

（3）3ml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。

（4）细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养2分钟后，在显微镜下观察细胞系的消化状态。

请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部至大部分贴壁细胞悬浮，加入3ml血清终止液，终止细胞消化。每种细胞的消化时间是有差异的。