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组织免疫组化(IHC)
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生产厂家上海昆盟生物科技有限公司(COWELDGEN SCIENTIFIC)是一家专注于生命科学领域提供相关试剂产品和服务的生物高科技企业,坐落于上海聚科生物产业园。公司主要提供种类齐全的细胞系和多种原代细胞、质量稳定的细胞培养试剂以及检测试剂产品、成熟高效的技术服务。本着“守正创新,科学严谨”的理念,我们以高标准塑造行业品牌,以全新的视野构建现代企业,勇于探索和创新。公司业务范围涉及全国各省市自治区,目前已与国内多家医院、高校、科研院所、生物科技公司建立了良好的合作关系,赢得了良好的市场声誉和广泛的认可,我们保证将继续为广大科研用户提供专业、高效、优质的产品及服务!
组织免疫组化(IHC)
实验方法
1)石蜡切片自37℃恒温箱过夜烤片后取出,室温放置5分钟后,双蒸水浸泡5分钟,0.01M PBS(pH7.2-7.4)浸洗5分钟×3次。
2)加入EDTA缓冲液,微波至沸腾拿出微波炉,自然冷却至室温。
3)0.1% triton X-100透膜10分钟。PBS洗三次。
4)3%过氧化氢(in PBS)RT,15min。重复此步骤操作1次。
5)用吸水纸擦干组织周围的玻片,用组化笔画圈,滴加免疫羊血清封闭30分钟(室温)或过夜(4℃)。
6)倾去封闭血清,不用清洗,直接滴加稀释好的一抗,4℃湿盒过夜。次日取出,倾去一抗,PBS清洗三次。
7)滴加稀释的二抗,37℃孵育1h。倾去二抗,PBS清洗3遍。
8)加DAB显色剂,每样加上100ulDAB,5-20s内显微镜下观察有无特异性信号。显色后立即用蒸馏水冲洗终止反应。如无特异性表达可适当延长DAB显色时间。
9)苏木精染色液复染,蒸馏水洗2min,苏木精复染10s-15min,蒸馏水洗,盐酸酒精(70%乙醇:盐酸=99:1)分化20s,蒸馏水洗,稀氨水(1%)反蓝10s。流水冲洗,镜下观察。
10)脱水透明,95%乙醇5min,100%乙醇5min,2次(2瓶无水乙醇).二甲苯Ⅰ10min二甲苯Ⅱ10min。封片,中性树胶封片。
实验周期:组织免疫组化(IHC)1-2周,组织免疫荧光(IF)-普通荧光显微镜观察1-2周(≤50个样本),组织免疫荧光(IF)-共聚焦荧光显微镜3周(≤20个样本)。
细胞生物学实验服务
v 细胞传代培养
v 原代细胞分离培养
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分子生物学实验服务
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