小鼠抗血清ELISA效价测定检测试剂盒说明书

一、原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法定量

检测血清的效价。

二、适用范围

定量检测动物血清的效价。

三、所需材料

仪器：微孔板酶标仪450 nm/630 nm、均质器、振荡器、离心机、天平（感量0.01 g）、离心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：单道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

试剂：去离子水

小鼠抗血清ELISA效价测定检测试剂盒说明书

五、 试剂盒组成

六、溶液配制

配液: 洗涤工作液

   用去离子水将20×浓缩洗涤液按1 : 19体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月，用前一天取出回温。

七、样本前处理                                                   

样本处理前须知：

① 处理完的样品应及时进行下步检测，实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

② 样本数目超过8个时推荐使用排枪加样。

血清（稀释倍数：1000、2000、5000、10000）

① 取血清按以上稀释倍数依次稀释1000、2000、5000、10000倍混匀；

② 取100μL用于分析。

八、 酶标免疫测定程序

① 将所有所需试剂从冷藏环境中取出，待其*回升至室温后方可使用，根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~2小时。注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

②  按标血清稀释液和样品双孔平行的数量使用微孔。

③  加血清稀释液/血清：加血清稀释液/血清100µL 到对应的微孔中，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min。

④  洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，

加入洗涤工作液300 µL/孔，每次静置20s，甩去孔内液体，重复洗涤3次，最后一次用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。

⑤ 加酶标物：加入酶标物100 µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光孵育30 min。

⑥ .甩干孔内液体，重复洗板3次，最后一次用吸水纸拍干。

⑦ 显色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物    

液B液50 µL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应10min。

⑧ 测定：加入终止液50µL/孔，用酶标仪立即  测定450/630nm处的吸光度值。

九、 结果判定

以OD值≥1.0为标准。

血清稀释倍数≤2000倍OD值≥1.0的判断为低效价，血清稀释倍数在2000~5000倍OD值≥1.0的为中等效价，血清稀释倍数在≥5000倍OD值≥1.0的为高等效价（详见试剂盒专业分析软件，以便进行大量样本的分析计算。）

十、 注意事项

① 根据体积大小不同取出回温的时间从1小时~3                                                          小时，体积15毫升以上的优先从冷藏环境取出 回温。

②  洗板拍干后应立即进行下一步操作。

③ 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

④不使用过了有效期的试剂盒，不交换使用不同批号的试剂。

⑤ 0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为10min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到15-20min，反之则减短反应时间。

⑦ 底物液B液长期使用变为浅蓝色时，请放心使用，不影响检测结果。

⑧ 未提及样本请致电本公司技术服务部。

十一、贮藏条件及保存期

    贮藏条件： 2～8℃

保 质 期： 12个月

十二、问题与对策      

（见下页）