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山羊痘病毒实时荧光PCR检测试剂盒说明书

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参数
供货周期:现货 应用领域:生物产业
山东蓝都生物科技有限公司

高级会员8年 

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山东蓝都生物科技有限公司成立于2015年,秉承“品质至上、客户第一、追求ZHUOYUE”的生产服务宗旨,“自强不息、艰苦奋斗、务实创新、追求ZHUOYUE”的精神,不忘初心,目标坚定,做BEST产品,服务于行业客户。食品安全检测事业部现有保健品类、激素及类固醇类、重金属类、喹恶啉类、消炎镇痛类、水产违禁类、牛羊马类、农药DU品类、禽病类、生理活性物、体外诊断IVD炎症、细菌含传染病类等多个品种。

主要产品有真菌毒素免疫亲和柱、真菌毒素嵌合酶联免疫检测试剂盒、真菌毒素胶体金定性检测卡、量子点定量检测卡、食品安全定量/定性检测箱、食品安全抗原及单克隆抗体、单克隆及多克隆抗体制备试剂耗材及相关仪器、食品安全与动物疫病类抗原及单克隆抗体等约1200种,部分产品已经出口到德国、俄罗斯、伊朗、英国、美国等多个国家。

地址:山东省滨州市国家经济技术开发区黄河二路376号 

邮编:256600  


详细信息

山羊痘病毒实时荧光PCR检测试剂盒说明书

【用途】 用于山羊痘病毒核酸的检测。

试剂

编号

20T

50T

保存

裂解液

4mL

10mL

室温

A

无水乙醇

4mL

10mL

室温

去蛋白漂洗液

12mL

28mL

室温

洗涤液

32mL

77mL

室温

洗脱液

2mL

5mL

室温

蛋白酶K

0.2mL

0.5mL

-20

B

PCR反应液

200μL

500μL

-20

引物和探针

40μL

100μL

-20

阳性对照

30μL

30μL

-20

灭菌水

300μL

300μL

-20

山羊痘病毒实时荧光PCR检测试剂盒说明书操作步骤】

1.样本前处理及核酸提取  

样本前处理

取适量皮肤丘疹、肺部病变组织、淋巴结,于灭菌研钵充分研磨,用PBS按照13体积稀释成均匀乳剂,10 000rpm离心3 min

核酸提取:

(1)取200μL上述样本离心后上清液和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL离心管,然后加入200μL裂解液,剧烈振荡。(蛋白酶K开盖使用后建议存于2-8)混匀5~10秒。

(2)56℃温浴10分钟。

(3)在上述离心管中加入200μL无水乙醇,充分振荡混匀510秒。

(4)将步骤3中混匀的液体转移至一只套有收集管的纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,弃去套管内液体。

(5)将500μL去蛋白漂洗液加入纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,并弃去套管内液体。

(6)将700μL洗涤液加入纯化柱上,10 000rpm离心1分钟,并弃去套管内液体。

(7)可选:重复步骤(6)。

(8)再将纯化柱放回接液管上,13 000rpm离心1分钟。

(9)将纯化柱移到一只干净的1.5mL离心管中。

(10)向离心柱内加50μL洗脱液,室温静置1分钟后12 000rpm离心1分钟,弃纯化柱,离心管内液体中含有基因组DNA。提纯的基因组DNA如果不立即使用,请保存于-20℃。

2. 荧光PCR加样体系(总体系20 μL将下列试剂加入PCR反应管中。

PCR反应液

引物和探针

10μL

2μL

模   板

灭菌水

2μL

6μL

(注:阴、阳性对照设立,由试剂盒提供的阳性对照、灭菌水直接替换“模板”即可。)

3. 反应程序

在荧光PCR仪上进行以下反应:95 ℃ 180s,循环95 ℃ 5 s55 10 s72 20 s,共45, 每次循环的第步(72 20 s)收集荧光信号(报告基团HEX,淬灭基团BHQ1)。

【结果判定】

1 阈值设定

检测结束后,根据收集的荧光曲线和 Ct值直接读取检测结果,Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。

2 质控标准

(1) 阴性对照:无Ct值无扩增曲线。

(2) 阳性对照:Ct值≤30.0,并出现典型的扩增曲线。若阴、阳性对照组结果不成立,则视为无效检验。

3 结果描述及判定

阴性  被检样品无Ct值且无明显扩增曲线,判为山羊痘病毒核酸阴性;

阳性  检测样品Ct值≤42.0且出现典型的扩增曲线时,判为山羊痘病毒核酸阳性;

可疑  对于Ct值>42.0的样品且出现典型的扩增曲线或者Ct值≤42.0但无典型的扩增曲线时,应重检,重检Ct值≤42.0且出现典型的扩增曲线时判为阳性,其他情况均判为阴性。

【注意事项】

1.B使用之前请*溶解并离心数秒后使用,蛋白酶K开盖使用后建议保存于2-8℃。

2 反复冻融试剂将降低检测灵敏度,尽量减少反复冻融

3 为避免样本间的交叉污染,模板最后加,加模板时先加阴性对照,再加检测样品,最后加阳性对照,有条件的实验室加模板的移液器应与加其它组份的移液器分开。

4 上机前注意检查确保反应混合液内无气泡,且反应管盖紧,以免荧光物质泄漏区污染仪器。

【生产企业】  

企业名称:山东绿都生物科技有限公司

生产地址:山东省滨州市经济开发区黄河二路169号绿都生物工程高科技园      

【有效期】本制品有效期为1年,生产日期见包装内侧。

仅供兽医诊断使用

长期提供原核、真核蛋白表达构建服务

长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务


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