汉坦病毒通用型（HTV-U）核酸检测试剂盒
【产品名称】 
商品名称：汉坦病毒通用型（HTV-U）检测试剂盒(荧光 PCR 法) 
Name  ： Hantavirus Detection Kit(Real-Time PCR Method) 
【包装规格】50T/盒 
【预期用途】 
汉坦病毒通用型（HTV-U）核酸检测试剂盒适用于检测病患血液、尿液及病变组织中的汉坦病毒 RNA，适用于汉坦病毒感染的辅助诊断。 【检验原理】 
本试剂盒对汉坦病毒基因组保守区设计特异性的引物和探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对汉坦病毒 RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。 

【试剂组成】

注： 
1）不同批号试剂不能混用。 
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。 
【储存条件及有效期】 
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5 次，有效期12 个月。 
【适用仪器】 
ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量PCR 检测仪。 
【标本采集】 
抽取全血5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，或采集患者尿液、病变组织。 
【保存和运输】 
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6 个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。 
【使用方法】 
1. 样品处理（样本处理区） 
1.1 样本前处理 
血液：直接取100μL 于灭菌离心管中或取血清100ul 于灭菌离心管中 
尿液：取100μL 于灭菌离心管中； 
组织样品：称取组织样品约 0.5g，置于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，匀浆后取 100μL
于1.5mL 灭菌离心管中； 
1.2 核酸提取 
推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。 
2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满10 份，多配制1 份)，每测试反应体系配制如下表：

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。 
4. PCR 扩增（核酸扩增区） 
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；荧光通道选择： 
检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX

选择 None 即可。 
4.3 推荐循环参数设置：
. 结果分析判定 
5.1 结果分析条件设定

设置Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

.2 结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 
可疑：检测通道 35阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。 
6. 质控标准

阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示； 
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct 值≤32；
以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

【生产企业】 
企业名称：上海晅科生物科技有限公司