如何做好生物制药公司的灭菌设备验证

一、 法规要求

GMP指南（无菌药品）

GB8599-2008大型蒸汽灭菌器技术要求自动控制型

药品生产验证指南2003

二、 内容

1.GMP指南（无菌药品）

博维-狄克实验（BD实验）、气密性实验、空载热分布测试、满载热分布和热穿透实验、微生物挑战性实验、呼吸器的评估、在验证等。

2.GB8599-2008大型蒸汽灭菌器技术要求-自动控制型

蒸汽渗透（BD实验）、橡胶负载的灭菌效果、温度参数、满负载温度、真空泄露。

3.药品生产验证指南2003

概况、生物指示剂选用、F0值选择、空载状态热分布、装载热穿透实验、生物指示剂验证。

三、 标准

1.GMP指南（无菌药品）

1.1博维-狄克实验（BD实验）

内部指示卡色条呈现均匀变色

1.2气密性实验

不应超出1.3kPa/10min

1.3空载热分布测试

无硬性标准，考察设备本身性能变化满载热分布与空载热分布相同：同一时刻各点之间的差值应不超过2度。

1.4满载热分布和热穿透实验

F0值大于12。

1.5微生物挑战性实验

灭菌程序可以实现10-6的存活概率。

2.GB8599-2008大型蒸汽灭菌器技术要求-自动控制型

2.1蒸汽渗透（BD实验）

变色均匀

2.2橡胶负载的灭菌效果

生物指示剂不再具有生物活性，阳性对照具有生物活性。

2.3温度参数

灭菌温度为下限，上限为+3度。

2.4真空泄露

压力上升速度不应超过0.13kPa/min。

3.药品生产验证指南2003

3.1空载状态热分布

各测温点间的温差允许在±1度之内。

3.2气密性实验

抽真空使内室压力为7kPa（或以下）关闭全部连接阀门，记录时间与压力，等待300秒，但不得超过600秒，让灭菌器冷凝水汽化，然后记录时间与压力，600秒±10秒，再记录一次，计算600秒内的升压速率。

4.空载热分布测试

至少10个探头（较大15-20），几何中心和角落代表性，温度传感器及冷凝水放口放置，需进行3次测试。

5.满载热分布和热穿透实验

进行3次测试，明确装载布置图。

6.微生物挑战性实验

指示剂位置应靠近温度探头的位置

7.呼吸器的评估完整性测试

8.再验证

通常为12个月

再验证监控运行数据的资料回顾，以证明灭菌程序无偏离趋势

这里说明下，再验证涉及到的新名词：工艺标准和工艺执行标准，后面会进行详解。

四、空腔负载实验

药品生产验证指南2003

概况：对设备结构，功能与操作进行描述

生物指示剂选用121度湿热灭菌采用嗜热脂肪芽孢杆菌

F0值选择过度热杀F0值12；残存概率F0值8，一般F0值12属于有效杀灭。

空载状态热分布冷凝水排放口（一般冷点）放置一个热电偶，运行3次。

装载热穿透实验确定装载方式下冷点，在最大和最小装载下分别进行。

生物指示剂验证同GMP指南，提及灭菌前生物负荷检查中未检出耐热孢子。

五、验证流程

验证前的URS(用户需求标准）-FDS（功能标准）-DQ（设计确定）FAT（工程测试）IQ-OQ-PQ（安装-运行-性能确认）就不多说了，这是标准流程一个不能少。

以上标准流程做完后才是真正灭菌柜验证的开始。

这里有个重点要画下来，考试要考的，就是偏差管理，变更控制。

5.1工艺标准与工艺执行标准

每一种产品为了达到有效的灭菌，最后设定的标准不一定就是工艺标准，在这里在引进个说法叫工艺执行标准。

工艺执行标准是为了达到工艺标准而根据产品情况和设备情况经验证得来的执行标准。

这里要说明的是我们灭菌的实现是工艺标准当中定的，这个是变不了的。举个例子来说比如说115度，30分钟或者121度15分钟，这个是不能变的，这是工艺标准。我们为了这个工艺标准，根据我们产品特性和设备情况所做的结果，也就是说验证出来的结果，我们设定的值，这个叫工艺执行标准。为了达到115度30分钟的工艺灭菌标准经验证得出我们需要在设备上设定115度32分钟才能使灭菌器腔体内所有的点都满足工艺标准，因此在实际执行中我们设定的灭菌器标准是115度32分钟。

就像刚才举的例子，只有在操作规程中说明按照工艺执行标准来进行操作，才能达到我们工艺标准的要求。工艺标准和工艺执行标准，这是两个概念。

工艺执行标准是为了达到工艺标准，而设定的一个标准，是我们实际操作的写入SOP中的。但不是工艺规程和STP当中的内容。

工艺执行标准是会变化的，所以再验证就很主要了。要按时进行在验证或者根据设备及产品的情况进行再验证

而且工艺执行标准是个变值，它会根据我们产品的不同以及我们设备连续使用的情况，或者使用年限而进行一定量的变更或者是变化的，甚至包括我们设备更换零配件也会对工艺执行标准产生一定影响。

5.2BD试验

在性能确认中：BD测试目的为了测试冷空气排放效果，而冷空气的存在主要影响有两个：一是纯蒸汽参杂冷空气影响热穿透效果。二是灭菌器内水分降低，影响杀灭效果。验证进行BD测试，证明其设计无误，再验证无需进行。

5.3冷点位置

空载热分布确定冷点位置，灭菌过程始终高于121度，计算极差值。

由于我们的这个基础架构能力和材料能力越来越好，对于现在的灭菌柜，这个冷点位置和以前会有不同，但这个冷水凝结的地方一定会对我们灭菌效果产生影响，而且冷水凝结的地方，一般的情况下是不会变的。

5.4装载方式

满载确定满载量及摆放方式，作为日常负载依据。在灭菌的时候，如非必要千万不要变更摆放方式。一旦变更摆放方式之后，我们一定要重新做验证。因为在摆放边方式变更的时候，绝对会对我们满载热穿透有很大的影响。

5.5生物指示剂试验

确认预定的灭菌程序能够在产品灭菌后，微生物存活率＜10-6。

5.6脉动真空灭菌柜空载探头布点原则

实际的探头数量和布点位置只有一个目的，保证取样点的代表性，能够反馈出测试目标的性能。

GMP指南内容

至少10个探头（较大15-20），几何中心和角落代表性，温度传感器及冷凝水排放口放置。

5.7再验证周期

1.仪表校正应每季度进行一次，或根据内部有关校验周期的规定进行校验。

2.微生物标定物试验应每季度进行一次。

3.热分布试验应每年进行一次。

任何重大变更（改变装载状态，改变灭菌时间等）或重大维修完成后，均要进行验证，以证明不同变更对已验证的灭菌系统的灭菌效果没有不良影响。

实际使用中可以根据自己品种及设备的情况制定相关要求

数据的汇总和分析也是比较重要的环节，更主要的是重现性！

最后给大家个公式有兴趣的可以手动计算F0值，，计算公式：F0=ΔtΣ10(T－121)/10

公司背景介绍：

泽恒.华谱在计量校准、验证与确认的优势是专注做生物制药质控服务，针对一些特殊的仪器都非常熟悉，核心团队来源于制药公司和仪器厂家，对仪器和GMP法规都很熟悉，比如：我们团队专门研发了替代进口的荧光定量PCR仪校准装置，大大降低荧光定量/定性PCR仪校准的成本（远低于同行）；我们开发了细胞计数仪的校准内部规程；开发了细胞复苏仪的内部校准规程；开发了凝胶电泳扫描仪的校准规程；我们开发了温度验证所需要的超低温和超高温一体化无线探头，降低用户大量使用探头时的成本，代替了进口；这些例子还有很多，因为我们都是生物出身，所以我们关注每一个生物用户工艺要求，在生物制药仪器设备上面专注，“与质量同行、做仪器设备质控”，为了让生物制药更安全而努力。

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泽恒.华谱是专注于为生物制药行业提供实验室仪器计量校准、仪器设备验证与验证/厂房验证的专业服务商。我们给制药客户解决的是一站式QC/QA/工程部/验证部/生产部的质控外包服务。