支原体检测试剂盒
关于我们：
上海乐赛生物科技有限公司是一家专业从事生命科学科研和生产高品质试剂和耗材的研发、生产及销售的企业。由多位深耕于专业多年的精英团队创立，核心成员拥有丰富的从研发到市场的经验，帮助我们为客户提供更优质可靠的国产化产品和更灵活高效的服务。
我们的愿景是：
面向国内，走向国际，成为细胞类试剂和耗材的中国制造先头梯队。
我们的使命是：
通过提供优质细胞培养类产品，满足科研和生产对于产品高品质、快捷性和成本可靠的需求。
详细信息
在细胞培养中，良好的实验规范和定期检测支原体污染也十分必要。支原体检测试剂盒支原体检测的方法有很多种，如直接培养、DNA 荧光染色、ELISA和PCR法等。支原体检测试剂盒主要采用PCR方法对各种生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等）支原体感染的检测。通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中的支原体，所用引物为根据支原体16S-23S rRNA序列保守区域设计，只特异性扩增支原体 DNA，检出灵敏度与特异性均较高。PCR扩增及电泳分析只需数个小时，操作方便简单。
二、产品特点
方法学：PCR法
特点：灵敏、特异、快速，操作简便
三、产品成分
组分编号 | 组分名称 | 规格 | 储存条件 |
-A | Green Taq Mix | 250μl | -20℃ |
-B | ddH2O | 250μl | |
-C | Positive Control Template | 50μl | |
-D | Primers | 50μl |
四、使用说明
(请详细阅读使用说明后再开始相关实验)
1.待测细胞连续传代3次或培养至两周；
2.细胞达到80% confluency或以上的时候，取1ml上清，进行低速离心（300g，5min，4℃）；
3.离心结束后取950μl上清液，转移至新的无菌EP管中，以去除培养基中的细胞；
4.将上清液高速离心（12000g，10min，4℃），离心结束后，去除900μl上清，剩余50ul用以重悬沉淀（可能肉眼不可见）；
5.将重悬好的沉淀放置4度冰箱，作为PCR的模板备用；
根据下表，配制PCR反应液：
试剂 | 实验组 | 阳性对照 | 阴性对照 |
A | 12.5μl | 12.5μl | 12.5μl |
待测样品 | 5μl | / | / |
C | / | 5μl | / |
B | 5.5μl | 5.5μl | 10.5μl |
D | 2μl | 2μl | 2μl |
★注：为防止Positive Control Template 污染，请将实验组和阴性对照组加完以后，最后再将C液加入阳性对照组
6.PCR程序
步骤 | 温度 | 反应时间 | 循环数 |
Step 1 | 95℃ | 5min | 1 |
Step 2 | 94℃ | 30s | 5 |
50℃ | 30s | ||
72℃ | 35s | ||
Step 3 | 94℃ | 15s | 23 |
56℃ | 15s | ||
72℃ | 30s | ||
Hold | 12℃ | ∞ | / |
7.制备DNA gel：称取一定量Argrose粉末，用1X TAE buffer配制成1.5%的DNA GEL；
8.待PCR反应结束后，取8-10μl的PCR 反应液（无需要加 loading buffer）直接进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，确认PCR扩增产物；
9.目的条带为518bp。示例如下：
五、推荐使用频率
新细胞进入实验室 | 必检 |
液氮保存前 | 必检 |
定期常规 | 每月一次 |
发现污染后 | 每周一次 |
发现细胞异常 | 随时检测 |
