MYC-Magnetic免疫沉淀试剂盒
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MYC-Magnetic 免疫沉淀试剂盒(PROCAP MYC-Magnetic IP/CoIP KIT)
货号:PMM025
存储条件:-20°C保存。MYC-Magnetic beads经常使用可在4℃保存,在-20或-80℃长期保存,避免反复冻融。
试剂盒组分:
货号 | 名称 | 规格 |
MNM-25-1000/MNA-50-2000 | MYC-Nanoab-Magnetic | 1000ul(25T)/2000ul(50T) |
IP001A | 裂解液A | 30ml |
IP001B | 裂解液B | 30ml |
IP001C | 漂洗液C | 30ml |
IP001D | 漂洗液D | 30ml |
IP001E | 洗脱液E | 3x1ml |
CLJ0615 | 磁力架1.5ml,6孔 | 个 |
产品简介:
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的纳米抗体开发的;纳米抗体由传统抗体的重链可变区(VHH)组成,具有分子量小、亲和力高、特异性强,且耐酸碱高温环境等特点;基于纳米抗体的优点,LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀结果出现轻重链污染的现象,并且节省实验时间。
实验步骤:
提示:尽量在4℃进行操作,洗脱蛋白方法一除外。
1.植物组织裂解处理:
取适量植物组织样本(叶片等)放置于冷冻液氮中,之后将冷冻后得植物组织样本放于研钵进行研磨,尽可能充分研磨破坏其细胞壁。加入500-1000ul 裂解液A或裂解液B(需加入PMSF溶液)进行裂解,为了提高裂解效率,可加入 200ul 玻璃粉按照600-800g离心力充分震荡 30min,裂解完成后 12000 rpm,离心30min,吸取上清置于新的离心管中,弃去沉淀。(进行第3步)
2. 动物细胞裂解
2.1 收集细胞:
根据实验要求收集适量的细胞,通常每个免疫沉淀反应大约使用 106-107 个细胞。
2.2 裂解细胞:
根据实验要求选择使用溶液A或溶液B裂解细胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制剂,用500μl预冷的溶液A或溶液B重悬细胞;置于冰上30分钟,可每10分钟充分吹打一次;4℃,20,000g离心15分钟,将裂解产物(上清)转移到一个新的预冷管中,丢弃沉淀。
3. 平衡珠子:
振荡充分混匀珠子,吸取40μl MYC-Nanoab-Magnetic beads到500μl预冷的溶液A或溶液B中,4℃,在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态,丢弃上清液。(此步骤可选)
3. 结合蛋白:将平衡好的beads(如果未做第 4 步,可在细胞裂解产物中直接加入40μl slurry)加入到细胞裂解产物中,于4℃旋转混合结合30min-1h。在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态,丢弃上清液。
5. 清洗珠子:
根据实验要求选择使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃,利用磁性分离,丢弃上清液。
用500μl预冷的溶液C或溶液D重悬beads,4℃,在磁力架上分离磁珠直到上清变成清亮的状态,丢弃上清液并重复洗涤 2 次。(可选:在第二次洗涤的步骤中增加盐浓度到 500 mM)。
6. 洗脱蛋白
方法一:
加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬beads。95℃,加热10min充分变性,MYC-Nanoab-Magnetic Beads 可在磁力架上进行分离,收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
方法二:
加入溶液E洗脱结合的蛋白,孵育时间30秒,期间不断混匀,利用磁性分离收集上清,为了中和酸性的甘an酸,立即加入5μl 1.0 M Tris(pH10.4)。
注意:为了提高洗脱效率可以重复这一步。收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。