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过敏性哮喘动物模型
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代理商上海申知心生物科技有限公司(简称“申知心生物”),是一家“提供全面、系统、高质量的心血管相关疾病研究服务平台”的创新型企业,致力于搭建基础医学和临床转化服务体系并开展基于药效学评价的临床前CRO服务,提供各种成熟的心血管疾病模式动物。公司投资建立的动物实验中心,建有清洁级、SPF级动物实验室,面积约1800平米。为科研院所、临床科室及医药企业提供专业定制化的动物模型、药物筛选、药理药效评价、安全性评价、病理分析及分子生物学检测等服务。
申知心生物拥有专业的技术团队,核心成员来自中科院、复旦、交大、同济等国内重点高校及科研机构,并与心血管病研究所保持密切合作,能够提供完善的实验技术咨询与服务。
过敏性哮喘动物模型实验服务介绍:
BALB/c小鼠于第0天和第14天分别腹腔注射OVA液和DBP溶液,第21~23天连续3天以OVA溶液雾化激发,每天于上午下午固定时间雾化2次,每次20min。雾化过程中观察小鼠一般行为变化,后一次雾化结束后24小时,小鼠摘眼球取血,取支气管肺泡灌洗液及肺组织。
一般行为学观察 观察小鼠在雾化过程中是否出现挠脸、毛发竖立、呼吸急促、烦躁不安、大小便失禁等现象。
血中Eos计数 后一次雾化激发结束24h后,小鼠摘眼球取血,获得血液后立即取出20 μl与380μl 嗜酸性粒细胞稀释液混匀,利用细胞计数板于光学 显微镜下进行Eos计数。
血清中IgE测定 将获得的血液静置2h后,离心,3500 rpm,15min,取血清,按IgE ELISA试剂盒说明书进行测定,并通过样本总蛋白含量进行结果校正。
BALF细胞分类计数 将小鼠仰卧位固定,打开胸腔后,结扎右肺及左侧肺上叶。分离并暴露气管,用适宜针头进行插管,以预冷PBS反复灌洗肺组织(0.5 mL/次,共两次),收集BALF,低温离心( 3500 rpm,10min ),取上清,保存于-20℃待测。细胞沉淀用0.2 mL预冷PBS重悬,吹打均匀后取10 μl于细胞计数板上在光学显微镜下计细胞总数,剩余细胞悬液涂片,用快速瑞姬氏染液染色,显微镜下进行细胞分类计数。
BALF中IL-4、IL-5、IL-9、IL-13、IFN-γ的测定 将获得的BALF上清根据相关细胞因子检测试剂盒的说明书进行各指标定量检测,测定结果经总蛋白含量校正。
肺组织中IL-4和IFN-γ的测定 将右侧肺组织用预冷的PBS研磨得15 % 组织匀浆,低温离心,3500 rpm,15min,取上清按照 ELISA 测定试剂盒的操作步骤进行IL-4和IFN-γ测定,并通过样本总蛋白定量来进行校正。
肺组织HE及PAS染色 剪取左肺上叶,置10%中性福尔马林中固定,石蜡包埋,常规石蜡包埋,切片,HE及PAS染色,镜下观察肺组织炎性细胞浸润及黏性蛋白增生情况。
分子实验平台:高效运作了qRT-PCR、Western blot、双向电泳技术、分子克隆与质粒构建、流式细胞仪检测、免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝胶电泳迁移实验、酶联免疫吸附测定、外泌体抽提及鉴定等实验。
基因组学平台:可以完成甲基化检测、基因芯片分析、高通量测序等实验。
蛋白组学平台:能实现LC-MS、ITRAQ、蛋白质修饰分析等重点实验项目。
病理学平台:涉及免疫荧光染色、免疫组织化学染色、HE染色、特殊染色等实验。
临床前CRO服务:主要提供呼吸系统、神经系统、免疫系统性疾病的药效学评价服务,包括靶点验证、体内外模型的构建、药物筛选、药物分析、药效性评价、药代
动力学和药理学研究以及院内制剂研发等。
项目转化服务:助力客户进行方案设计、联合课题申报、药物项目引进和孵化,解决客户对实验技术平台、专业人和融资的需求。