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IML-002 L929-LUC-GFP（小鼠成纤维细胞-绿色荧光蛋白）
- 型号
- IML-002
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上海淳麦生物科技专注于是一家专注于研发和生产原代细胞、肿瘤细胞及细胞培养相关试剂产品的生物高科技企业，可以为各类研究机构提供符合标准规范的原代细胞、肿瘤细胞及相关实验技术服务；
上海淳麦生物科技有一支由复旦大学和上海交大多名博士组成的研发团队，致力于为您的细胞研究及细胞培养实验提供高品质、稳定性良好的产品，做“您身边的细胞培养专家”。细胞培养提供全程服务，产品涵盖原代细胞、细胞系、免疫细胞及干细胞、胎牛血清、无血清非程序冻存液、培养基、基础培养基、“支原体”/“黑胶虫”清除试剂、细胞因子、胰酶、双抗等细胞培养及实验相关产品。
公司设立质量管理部，建立了高标准的质检系统，产品从原料、半成品、成品入库到销售之前，每一个环节都有严格的质检标准，并以标准的生产工艺，保证产品质量的稳定性。
详细信息
| 一、细胞基本属性 | ||||
| 细胞名称 | L929-LUC-GFP-PURO（小鼠成纤维细胞-绿色荧光蛋白） | |||
| 细胞别称 | L929-LUC；小鼠成纤维细胞-LUC；小鼠成纤维细胞-绿色荧光蛋白 | |||
| 种属来源 | 小鼠 | |||
| 组织来源 | 皮下结缔组织 | |||
| 生长特性 | 贴壁生长 | |||
| 细胞形态 | 成纤维细胞 | |||
| 细胞代数 | 10代以内 | |||
| 背景介绍 | Luciferase L929细胞稳定表达萤光蛋白。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤光蛋白活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。 该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。 1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠结缔组织)，细胞系L的克隆。细胞系L是建立的连续培养细胞系之一，而clone 929是的克隆株。从一只100日龄的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松结缔组织入脂肪组织中建立了亲本细胞系L。 第95代的细胞系L使用毛细管法分离单细胞建立了clone929。检测发现鼠痘病毒阴性。 | |||
| puro药筛浓度 | L929-LUC细胞puro药筛浓度为1. 0ug/ml，培养过程中可不用再添加puro，如若担心抗性随着传代时间降低，可定期用0.5ug/ml浓度puro维持。 | |||
| Luciferase活性检测 |  L929-LUC-GFP-PURO Luciferase检测报告下载 | |||
| 生物安全等级 | 1 | |||
| 细胞规格 | 1x106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装 | |||
| 支原体检测 | 无 | |||
| 保藏机构 | ATCC; CCL-1 ATCC; CRL-6364 BCRC; 60091 BCRJ; 0188 DSMZ; ACC-2 ECACC; ECACC; ECACC; 88102702 | |||
| 培养基 | 90%MEM+10%FBS+PS | |||
| 培养条件 | 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃ | |||
| 冻存条件 | 无血清冻存液，液氮储存 | |||
| 细胞货期 | 现货，1周左右 | |||
| 运输方式 | 复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递 | |||
| 供应限制 | 于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 | |||
| 特别说明 | 以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主 | |||
| 二、细胞培养操作 | ||||
| 收货方式 | T25瓶 | 冻存管 | ||
| 收货处理 | 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态 | 收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏 | ||
| 传代密度 | 细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养 | 第二天换液并检查细胞密度 | ||
| 传代比例 | 传代建议1：2传代 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿 | 一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶 | ||
| 传代方法 | a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 | 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 | ||
| 注意事项 | 1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。 2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。 | 1.收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存； 2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞。 | ||
| 到货须知 | 1.收到细胞后，首先观察并拍照记录细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，干冰运输的细胞检查干冰是否挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照（当天以及第 2,3 天请拍照），记录细胞状态 (所拍照片将作为后续服务依据)；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 3.由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 4.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。 | |||
| 备注：客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以技术服务电话： 按 2，我们随时给予解答。 | ||||
| 三、细胞冻存操作 | ||||
| 冻存液配方 | 无血清冻存液，液氮储存 | |||
| 细胞密度 | 待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 | |||
| 冻存方法 | a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加 1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事项 | 冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案 | |||
| 四、售后服务 | ||||
| 重发标准 | 1.细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发； 2.收到细胞未开封，如出现污染状况，重发； 3.收到细胞3天内，发现污染问题，经核实后，重发； 4.常温发货的细胞静置 2 小时后，干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，绝大多数细胞未存活，经核实后，重发； 5.常温发货的细胞静置 22 小时并且未开封或干冰冻存发货的细胞复苏 2 天后，出现污染，经核实后，重发； 6.细胞活性问题，请在收到产品 3 天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后，重发； 7.视具体情况而定。 | |||
| 不予重发 | 1.客户操作造成细胞污染，不重发； 2.客户严重操作失误致细胞状态不好，不重发； 3.非我们推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发； 4.细胞状态不好，未提供真实清晰的培养前 3 天的细胞状态照片，不重发； 5.细胞培养时经其它处理导致细胞出现问题的，不重发； 6.收到细胞发现问题与客服人员沟通的时间证明大于3天的，不重发； 7.视具体情况而定。 | |||
