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XSL0183 实时荧光定量PCR实验服务
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公司主要经营:技术服务,技术咨询,实验外包,动物实验,细胞实验,流式检测,病理检测,SCI论文,生信分析,细胞因子等实验;为广大客户带来快捷和方便。 在科学技术飞速发展的今天,紧跟时代步伐,以优良的品质,合理的价格,全心的付出和不断创新的精神为拼搏在科研一线的伟大工作者们提供高品质的服务!
实时荧光定量PCR实验服务
【星森林生物】提供快捷高效的实时荧光定量PCR(Real Time PCR,RT PCR)服务,所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 是一个常用的mRNA水平的基因表达定量技术。
服务内容
细胞/组织的基因差异表达检测,经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等),特定基 因在不同时段的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证。
组织/细胞样品中基因拷贝数的确定,DNA或RNA的相对和绝dui定量分析。
包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植 物转基因拷贝数的检测,RNAi基因失活率的检测等。
基因分型,基因突变及多态性方面的研究。
技术原理
Real-time PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线 对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和 标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。
实时荧光定量PCR技术具有特异性强,有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点,做到PCR每循环一次就收集一个 数据,建立实时扩增曲线,准确地确定Ct值,从而根据Ct值确定起始DNA拷贝数,做到了真正意义上的DNA定量。
技术流程
一、RNA的提取
二、DNase I 消化样品RNA 中的DNA
三、RNA琼脂糖凝胶电泳
四、RNA反转录为cDNA Real-Time PCR引物设计的要求
① Tm=55~65 ℃
② GC=30~80%
③ PCR扩增产物长度:引物的产物大小不要太大,一般在80~300 bp之间都可。 ④ 引物的退火温度要高,一般要在60 ℃以上。
五、cDNA与引物质量检测
选择特异性好,扩增效率高的引物作为实时荧光使用引物。
六、利用相对定量的方法分析目的基因表达量的情况:
常用的看家基因有β-actin,GAPDH,18S rRNA
七、定量PCR检测
八、扩增曲线和溶解曲线
溶解曲线全部为单峰表明为特异性扩增,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平 台期。
欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。
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