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XSL0183 实时荧光定量PCR实验服务

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XSL0183

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星森林(浙江)生物医学技术有限公司,是一家专注于生命科学和生物技术领域的高科技企业,经营产品主要包括常规生化试剂、分子生物学试剂、免疫组化坑体及细胞因子、细胞培养基、科研仪器及实验室常规耗材等生物技术服务。公司客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。 公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持、物流、售后服务等多个部门的服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户。

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详细信息

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实时荧光定量PCR实验服务

【星森林生物】提供快捷高效的实时荧光定量PCR(Real Time PCR,RT PCR)服务,所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 是一个常用的mRNA水平的基因表达定量技术。

服务内容

细胞/组织的基因差异表达检测,经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等),特定基 因在不同时段的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证。

 组织/细胞样品中基因拷贝数的确定,DNA或RNA的相对和绝dui定量分析。

包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植 物转基因拷贝数的检测,RNAi基因失活率的检测等。

基因分型,基因突变及多态性方面的研究。

技术原理

Real-time PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线 对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和 标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。

实时荧光定量PCR技术具有特异性强,有效解决了PCR污染问题、自动化程度高等特点,做到PCR每循环一次就收集一个 数据,建立实时扩增曲线,准确地确定Ct值,从而根据Ct值确定起始DNA拷贝数,做到了真正意义上的DNA定量。

 

技术流程

一、RNA的提取

二、DNase I 消化样品RNA 中的DNA

三、RNA琼脂糖凝胶电泳

四、RNA反转录为cDNA Real-Time PCR引物设计的要求

① Tm=55~65 ℃

② GC=30~80%

③ PCR扩增产物长度:引物的产物大小不要太大,一般在80~300 bp之间都可。 ④ 引物的退火温度要高,一般要在60 ℃以上。

五、cDNA与引物质量检测

选择特异性好,扩增效率高的引物作为实时荧光使用引物。

六、利用相对定量的方法分析目的基因表达量的情况:

常用的看家基因有β-actin,GAPDH,18S rRNA

七、定量PCR检测

八、扩增曲线和溶解曲线

溶解曲线全部为单峰表明为特异性扩增,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平 台期。

欢迎咨询详谈,我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。

更多实验技术服务请浏览网站其他内容!

 

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