生物细胞培养迁移侵袭MTT转染流式分选诱导

一、服务介绍

细胞迁移是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、 免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。检测细胞迁移能力的实验包括划痕实验和Transwell实验。

二、实验原理

细胞划痕实验是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上， 用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中yang区域划线，去除中yang部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。Transwell的基本原理是将transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液。将细胞种在上室内，由于膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

三、实验流程

划痕实验

1. 用marker笔在6孔板背后均匀得划横线；

2. 在孔中加入细胞；

3. 第二天用枪头垂至于背后的横线划痕；

4. 用PBS洗去处划下的细胞，培养不同时间，取样，拍照；

5. 数据处理：每个时间点细胞整体迁移距离=每个时间点距离长度-0时距离；

6. 结果统计分析。 

迁移实验（cell migration assay）

实验材料

（1）Transwell chamber: 24-well, 8.0-μm pore membranes (Corning)

（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基，10％血清培养基，PBS，0.02％EDTA

（3）固定液：甲醇

（4）染色液：Giemsa染液

（5）封片剂：中性树胶

（6）其他：小镊子，棉棒，载玻片，盖玻片

细胞侵袭实验 （cell invasion assay）

实验材料

（1）Matrigel (BD 5mg/ml)，-20℃保存

（2）其余材料同迁移实验 操作步骤

（3）Matrigel在4℃过夜融化；

（4）用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/ml，冰上操作；

（5）在chamber上室底部zhong央垂直加入100μl稀释后的Matrigel，37℃温育4－5小时使其干成胶状；

（6）后续步骤同迁移实验（1-8）。

注意事项

（1）Matrigel在过高或过低的温度均易凝固，因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃预冷； （2）铺胶时保证液面水平，胶的厚度均匀一致，切勿产生气泡；

（2）其他注意事项同迁移试验。

Transwell实验

1. 采用未铺 Matrigel 胶的 Transwell 小室用于实验；

2. 制备细胞悬液；

3. 接种细胞；

4. 检测穿过的细胞数；

5. 结果统计分析。 

注意事项

（1）根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为8.0-μm孔径（如AGS细胞），如果细胞 体积较大可以考虑用10-μm孔径；

（2）根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well chamber接种细胞数约为 2≈5×104/well，迁移时间12≈36小时；

（3）由于Corning公司的24-Transwell内含12个独立的chamber，为了避免操作污染，每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板（Corning）；

（4）如果细胞迁移能力较弱，下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的上清加50μg/ml FN （Fibronectin），具体可查阅相关文献；

（5）细胞悬液加入膜zhong央，尽量保证液面水平；

（6）固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细胞，以 免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；

（7）Chamber和膜上都无法标记，操作时应小心避免混淆实验组和对照组；

（8）充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。

四、服务说明

1. 客户提供：细胞株(冻存株或培养好的细胞)，所需药品，药物处理方式和浓度。

2. 公司提供：基本实验步骤、图片、数据分析结果、剩余药品。

3. 实验周期：大约2-3周左右，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。

服务对象：

1、在职或专职临床研究生、博士生

● 实验室条件的不完备

● 文章设计不完善

● 临床工作繁忙

● 实验条件摸索不成熟

● 科研时间严重不足

● ……

2、地市级三级医院科室主任、主任医师、主治医师等

● 公务繁忙

● 无精力、时间查找文献

● 没有时间寻找领域内新热点

● 科研圈子氛围不够浓厚

● 需要更前沿的科研技术应用

● 晋升、晋职需要

● ……

3、繁重科研任务的临床医生

● 文章设计不完善

● 科研任务繁重忙不过来

● 临床工作繁忙，千头万绪

● 周围环境和条件的局限

● 缺少实验数据

● ……

4、有志于科研的各级医院临床医生/护士

● 奋战在病房一线

● 时间都给了病人

● 有志于科研

● 心有余而力不足

● ……

整体外包服务介绍：星森林生物提供科研设计咨询及辅助实施：相关文献查阅、实验流程设计、实验可行性分析、基金标 书撰写、课题项目申请、整体实验实施、数据分析与处理、结题报告书写以及课题相关资料培训。

● 根据客户研究方向、基金标书、实验课题外包目标和要求，实验预算等设计可操作执行的详细实验方 案。

● 根据客户研究团队的研究基础，帮助客户策划、设计可执行的研究路线及实验方案。

● 帮助客户解决实验方案中需要突破的重要实验问题，优化实验流程。

● 指导客户筛选和确定实验方案中所需要的试剂、抗体及相关耗材。

● 根据客户需求推荐适合客户的其他增值外包服务。

收费标准/服务周期/提供结果：

欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。

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